海产品中异尖科线虫生物学检测技术的研究-水产品加工及贮藏专业论文.docxVIP

＼,＼吣、(㈣t ＼,＼吣、(㈣t 8删30㈣059 海产品中异尖科线虫生物学检测技术的研究 学位论文完成日期： 指导教师签字： 答辩委员会成员签字： j萄军 ／∥ 躬搬 夺；参濒 ／，J 独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 独创声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果， 也不包含未获得 !逵!垫逡查基丝盏噩挂剔重盟笪：奎拦亘窒≥或其他教育机构的学位或证书使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：许，他 签字日期：2口卢年j。月矽日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人 授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息 研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公 众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 许灿 导师签字： ‘右荔参 签字日期：lo／o年箩月巧日 签字日期：W co年卜月坫 海产品中异尖科线虫生物学检测技术的研究摘 海产品中异尖科线虫生物学检测技术的研究 摘 要 蛔目异尖科线虫(anisakid larvae)，是一类广泛分布于海洋动物的寄生虫，人 类异尖线虫病是因为食入了含活异尖科第三期幼虫的海鱼和鱿鱼而引起。我国出 入境部门相继报道进口鱼类查出该幼虫，并将异尖线虫列为国家禁止入境的二类 动物寄生虫。近些年随着生鲜海产品消费量的增多，我国人民感染异尖线虫病的 可能性不断加大，海产品中异尖线虫的潜在危害应引起足够的重视。 目前，对于异尖科线虫的检测，主要是水产品加工企业采用灯检方式对海产 品中的寄生虫进行在线筛选检测，但更为准确、实用的检测方法则较为缺乏。本 论文主要从海产品中异尖线虫的酶消化检测，间接竞争酶联免疫检测，直接竞争 酶联免疫检测等方面进行研究，并将建立起来的生物学方法与灯检法进行了比较 和验证试验，主要实验结果如下： 1．酶消化检测研究中，确定了酶水解鱼肉的最佳条件为：初始pH值为1．1， 温度为37℃，酶活力为8U／mL左右；消化后所得的虫体采用多重PCR方法替代 传统的形态学观察进行种属鉴定，从而初步建立了基于酶水解一多重PCR的异 尖线虫的酶消化检测体系。实际样本检测表明，该技术可以较为准确、快速地用 于海产鱼类中简单异尖线虫0nisakis simplex)和伪地新线虫(Pseudoterranova decipiens)的确证性检测。 2．以纯化的鼠多克隆抗体为检测材料，初步建立起海产鱼类中异尖科线虫的 间接竞争酶联免疫(Ci-ELISA)检测方法，该方法检测简单异尖线虫检测限为 46．9ng／mL，线性范围为60～600ng／mL；检测伪地新线虫检测限为78．7ng／mL， 线性范围为100一--1500ng／mL。孔间变异系数为6．2％--9．1％，板间变异系数为 7．7％21．0％。以鳕鱼和鲽鱼作为加标样品，在0．5条／1009～2条／1009的加标 范围内，该方法检测简单异尖线虫和伪地新线虫回收率约为65．2％--99％，相对 标准偏差低于15％。 3．以纯化的兔多克隆抗体为材料，采用过碘酸钠氧化法制备酶标记简单异尖 线虫兔多克隆抗体，并且建立起海产品中异尖科线虫的直接竞争酶联免疫 (Dc．ELISA)检测方法，该方法检测简单异尖线虫检测限为53．Ong／mL，检测伪地 新线虫检测限为60．Ong／mL，线性范围为100--5000ng／mL。孔间变异系数为 1．0％14．2％，板间变异系数为9．6％～19．8％。以蓝点马鲛、鲽鱼和鱿鱼作为加 1．0％14．2％，板间变异系数为9．6％～19．8％。以蓝点马鲛、鲽鱼和鱿鱼作为加 标样品，采用BSA稀释法有效克服了基质效应的干扰，在2条／1009--一10条／1009 的加标范围内，该方法检测简单异尖线虫和伪地新线虫回收率约为77．8％～ 107．0％，相对标准偏差低于20％。该方法可以在100min内对海产品中异尖科线 虫的特异性筛选检测。 4．分别采用直接竞争ELISA和酶消化方法检测经灯检过的南鳕样本，结果 表明，经灯检呈阳性的所有样本采用两种生物学方法检测均呈现阳性。10份灯 检呈阴性的样本采用直接竞争ELISA方法检测结果均为阴性，而另外20份灯检 呈阴性的样本采用酶消化法检测结果有2份