贵州汉族、苗族、布依族人群载脂蛋白M基因启动子区三个位点SNP与血脂相关性研究-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

2011 2011 届硕士学位论文 贵州省科学技术基金 贵州省科学技术基金 E2009-9 PAGE 10 贵州汉族、苗族、布依族人群载脂蛋白 M 基因启动子区三个位点 SNP 与血脂相关性研究 目的： 专 业：临床检验诊断学 研究生：莫 翼 军 导 师：黄韻祝教授 摘要 探讨载脂蛋白 M（apolipoprotein M ,apo M）基因启动子区三个位点多态 性是否在贵州不同民族之间存在差异，apo M 基因多态性是否影响 apo M 转录 活性和表达水平，apo M 启动子区不同的 SNPs 对血脂水平所产生的影响 方法： 奥林巴斯 AU5400 全自动生化分析仪测定血清甘油三酯(TG),胆固醇（TC）， 高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）；应用聚合酶链 反应 -限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）对 150 例贵州健康汉族，140 例贵 州 健 康 苗 族 ， 140 例 贵 州 健 康 布 依 族 人 群 血 标 本 apo M 启 动 子 区 域 C-1065A,T-855C,T-778C 进行基因多态性分析，选取不同的 SNPs DNA 片段插入 PMD-19T 载体测序正确后插入 PGL3-basic 载体，构建目的 DNA-PGL3-basic 载 体，转染 HepG2 细胞，用荧光素酶报告基因测定其荧光值。应用酶联免疫吸附 试验（ELISA）试剂盒测定血清 apo M。 结果： （1）三个民族间T-855C的基因型和等位基因频率无明显差异；在C-1065A 位点，苗族人群的A等位基因频率明显高于汉族（苗族人群:汉族人群=38.9%:30%， p=0.024）和布依族人群（苗族人群:布依族人群=38.9%:28.9%，p=0.012），而汉 族与布依族之间无明显差异；在T-778C位点，汉族人群C等位基因频率明显高于 苗族（汉族人群:苗族人群=12%:5.4%，p=0.005）和布依族人群（汉族人群:布依 族族人群 =12%:5.4%，p=0.005），而苗族与布依族之间未见差异。同时发现三个 位点不存在完全的连锁不平衡，单倍体型分析显示汉族的CTC型频率高于苗族与 布依族，苗族的ATT型频率高于汉族与布依族。（2）我们以三个位点均未突变为 对照(-1065CC,-855TT,-778TT)，荧光活性显示apo M T-778C位点CC型转录活性 明显低于对照;对apo M的表达水平分析发现单倍体CTC型apo M水平明显低于其他 基因型（p0.05），T-778C位点CT+CC型apo M水平明显低于TT型（p0.05）。 （3） apo M与血脂相关分析显示apo M与HDL-C正相关（p0.05）,血脂比较发现单倍体 CTC型HDL-C明显低于其他基因型（p0.05）；T-778C位点CT+CC型HDL-C水平明显 低于TT型（p0.05）。 （4）三个民族组间apo M和血脂比较发现汉族TC明显高于 苗族和布依族人群（p0.05）。 结论： apo M 基因启动子区 C-1065A 和 T-778C 位点存在民族差异, 贵州汉族人群 apo M -778 位点 C 等位基因遗传携带率高于贵州苗族与布依族, T-778C 位点 C 等位基因与血清 apo M 水平降低有关，并引起 HDL-C 的水平降低。 关键词：载脂蛋白 M，基因多态性，血脂，启动子,少数民族 前 言 脂蛋白和载脂蛋白在脂质代谢中起着重要的作用，高密度脂蛋白（HDL） 通过胆固醇逆转运(reverse cholesterol transport, RCT)作用能降低血液中胆固醇 （TC）含量，防止动脉粥样硬化。但到目前为止，HDL 的抗动脉粥样硬化 （atherosclerosis, AS）作用中 HDL 对 RCT 效率的调节作用尚未完全阐明。载 脂蛋白 M(apolipoprotein M, apo M)是新近发现的一种的人类载脂蛋白，且在血 浆中主要存在于 HDL 中。最近的研究表明 apo M 对 HDL 的代谢起重要作用。 apo M 于 1999 年由 Xu 等[1]报道鉴定，在血浆中优势表达于高密度脂蛋白中， 其次是在富含甘油三酯载脂蛋白（triglyceride-rich lipoproteins,TGRLP） 及低密度脂蛋白（LDL）中。人类 apo M 分子量约为 25kDa，基因定位于第 6 号 染色体短臂上(6p21．33)，人类 apo M 基因由 6 个外显子和 5 个内含子组成， cDNA 全长为 790bp，编码 188 个氨基酸残基，在所有的哺乳动物基因组中都能 够检测到 apo M 的基因。人类 apo M mRNA 在组织中仅在肝和肾表达，胚胎期少 量