MTT细胞毒理实验技术.pptVIP

MTT法检测细胞活性 掌握MTT 法检测细胞活性的基本原理和操作步骤 了解MTT法检测的应用 了解数据的处理和统计分析的基本方法。 MTT全称为3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。 仪器：二氧化碳培养箱、酶标仪、超净工作台、倒置相差显微镜等。 耗材：培养皿、96孔板等。 试剂： PBS（Nacl 8g、Kcl 0.2g、Na2HPO4 1.44g、KH2PO4 0.24g、调pH 7.4） MTT ，浓度为5mg/ml。称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可，两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。 丝裂霉素C，浓度分别为100、50、25、12.5、6.25、3.125，单位μg/ml，溶解于无血清培养基中。 DMSO,1640培养基。 第一实验小组 第二实验小组 第三实验小组 第四实验小组 第五实验小组 第六实验小组 1、将光吸收值数据输入EXCEL 2、根据数值结果在EXCEL中作柱状图