海洋异吲哚酮纤溶化合物药代动力学特性研究-食品科学与工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 上海海洋大学 博/硕士学位论文 答辩委员会成员名单 姓名 工作单位 职称 备注 焦炳华 第二军医大学 教授 主席 周培根 上海海洋大学 教授 委员 陈舜胜 上海海洋大学 教授 委员 杨宪时 东海水产研究所 研究员 委员 刘志东 第二军医大学 委员 倪玲 上海海洋大学 秘书 答辩地点 东海水产研究所 答辩日期 2014-5-24 海洋异吲哚酮纤溶化合物药代动力学特性研究 摘 要 海洋微生物因其拥有极其丰富多样的种类，并且生存于高压、低温、缺氧等 独特的海洋生态生态环境下，往往能够产生具有优良生物活性，并且结构新颖的 天然化合物，海洋微生物代谢产物，已成为药物创新与新药开发的重要来源。从 海洋生物资源中获取的小分子纤溶活性化合物与一些传统的临床溶栓药物相比， 具有较高的安全性及成本低的优势，而且其来源也更丰富。 药物治疗是一个受很多因素影响复杂的过程，药物代谢动力学特性是最重要 的影响因素之一。药代动力学可以明确药物的体内吸收、器官分布、组织代谢和 排泄消除等规律并为药效学及毒理学等药物临床前研究直接提供研究基础。因此， 药代动力学在新药开发、临床用药指导以及药品质量控制方面具有重要的理论与 实际意义。 本文的研究对象是一种结构新颖并且具有纤溶活性的吡喃并异吲哚酮类化合 物，是从长孢葡萄穗霉菌 FG216（Stachybotrys longispora FG216）的次级代谢产物 中分离纯化鉴定得到。FG216 是一种珍稀的海洋真菌，为本实验室于东海海域中 分离鉴定所得（保藏号：CCTCC M 2012272），其代谢产物被命名为 FGFC1（fungi fibrinolytic compound 1），FGFC1 的化学式 R/S 系统命名法的中文名称为 2,5-二 ( (2-(2,4,-二甲基-2,4-二烯)壬基)-(2-甲基-3-羟基)-吡喃并(5-羟基)-异吲哚酮基)-戊酸 （ 2,5-Bis-[8-(4,8-dimethyl-nona-3,7-dienyl)-5,7-dihydroxy-8-methyl-3-keto-1,2,7,8-ter tahydro-6H-pyran[a]isoindol-2-yl]-pentanoic acid），FGFC1 通过激活纤溶酶原活性发 挥溶血栓作用的独特机制，将有可能成为安全而高效的溶血栓新药。 本文对长孢葡萄穗霉菌 FG216 产异吲哚酮纤溶化合物 FGFC1 的发酵条件进行 了响应面优化，研究了 FGFC1 的肝微粒体代谢特征和啮齿动物药代动力学特性与 组织分布规律。 第一章综述了单因素试验设计、均匀试验设计、正交试验设计、响应面试验设 计等微生物培养条件优化的方法和高效液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)、 高效液 相色谱－串联质谱技术（LC-MS/MS）、飞行时间质谱技术（TOF-MS）、微透析技 术（MD）、核磁共振技术（NMR）等现代分析技术在药代动力学研究中的应用。 通过选取合适的优化方法及检测技术，为后续的研究提供保障。 第二章对长孢葡萄穗霉菌 FG216 发酵生产 FGFC1 的方法进行优化研究。通过响 应面法优化长孢葡萄穗霉菌 FG216 发酵产生纤溶活性化合物 FGFC1 的培养条件。 以单因素试验结果为参考依据，利用 Design-Expert V8.0.6 设计软件对 FG216 的 I 培养时间、培养基中诱导物鸟氨酸盐酸盐添加量以及培养温度进行 Box-behnken 模型的响应面试验设计，以每升发酵液中 FGFC1 的产出量为响应值进行培养条件 优化，并验证响应面预测值与 FG216 培养产生 FGFC1 实测值的一致性。结果表明， 最优培养时间为 9 天，最优诱导物添加量为 0.5%，最优培养温度为 28℃，在此培 养条件下，FGFC1 的产量可达 1978.33mg/L，实测值与响应面预测值接近，说明通 过响应面试验设计对 FG216 培养条件的优化是有效的。 第三章研究了海洋异吲哚酮纤溶化合物 FGFC1 在大鼠肝微粒体中的代谢规 律。本章研究建立了 FGFC1 在生物基质中（大鼠肝微粒体）的高效液相色谱检测 方法，并对 FGFC1 在大鼠肝微粒体中的降解规律进行研究，奠定 FGFC1 在动物 体内药物代谢动力学研究的基础。FGFC1 与大鼠肝微粒体混合孵育后, 用甲醇中 止反应并沉淀蛋白。离心后取上清液，用 0.22μm 的针头过滤器过滤，将滤液进行 高效液相色谱检测。高效液相色谱使用 C18 反相柱，以乙腈和 0.1%三氟乙酸溶液 为流动相，梯度洗脱，乙腈和 0.1%TFA 溶液由 45：55（v/v）改变为 85：15（v/v） 历时 30 min 并保持 30 min 不变，流动相流速 1mL/min，检测波长