均匀设计在植物组织培养中的应用-华南农业大学.PDFVIP

华南农业大学学报　　19 (1)　1998:21 ～23 J.South Chin Agric.Univ. 　 　 均匀设计在植物组织培养中的应用 1 2 徐华松 　唐　巍 (1 华南农业大学生物技术学院, 广州, 5 10642;2 中 大学数学系) 摘要　采用均匀设计及其分析方法来确定万利包心生菜器官发生的培养基配方, 在参选因素、 水平数较多的情况下获得较理想的结果, 并得出各激素浓度、外植体成熟度的最佳组合为:MS+ NAA 0.88 mg/L+BA 0.1 mg/L, 种子萌发5 d 时的下胚轴上段(0.5 cm). 关键词　均匀设计;组织培养;莴苣;激素;外植体 中图分类号　S 188 　　在植物组织培养中, 植物激素的种类、浓度以及外植体的部位、年龄等等的选择对植物 的愈伤组织诱导和植株再生影响很大, 并且各因素之间取怎样的组合效果最佳是人们期待 的.70 年代我国已把正交设计应用于植物的离体培养(广东省植物研究所遗传室, 1976), 从 此,正交设计成为植物组织培养研究的主要设计方法.随后, 孙洪涛等(1988)用多因子的方 差分析、洪树荣等(1990)用正交拉丁方实验来筛选培养基, 均获得了较理想的效果.但是,在 参选的因素、水平数较多时,正交设计及其它较流行的方法往往要求做较多的试验.方开泰 (1994)正是为了解决多因素、多水平问题而提出了均匀设计.因此, 作者采用均匀设计方法 对万利包心生菜的器官发生培养基中NAA 浓度、BA 浓度以及外植体的年龄进行选择, 旨在 找出最佳组合, 同时,又能大大减少试验次数. 1 　材料与方法 1.1 　外植体 试材用莴苣(L actuca sat iv a L.)万利包心生菜种子(由广州市蔬菜研究所提供)浸入体 积分数为70 %乙醇中30 s,再用质量分数为0.2%的升汞浸泡5 min, 立即用无菌水清洗4 次,接种于已消毒的质量分数为0.6%琼脂固化的基质上,培养至一定天数, 在超净工作台 上,切取下胚轴上段(约0.5 cm )为外植体, 接种于已消毒的各种NAA 、BA 浓度组合的M S 培养基上. 1.2 　培养条件 培养室温度控制在(25±2)℃, 光强为1 500 ～2 000 lx,每天照光 16 h,培养室湿度保持 在70%左右. 1.3 　均匀设计 1.3.1　因素、水平数的选定　选取NAA 、BA 的不同浓度及种子的萌发天数作为参选因素, 分别记为 A 、B 、C 三因素,水平数分别选取如下:A 代表NAA 浓度(mg/L), A 1=0.2, A 2= 0.4, A 3=0.6, A 4=0.8, A 5=1.0,A 6=1.2;B 代表BA 浓度(mg/L ),B 1=0.1, B 2=0.2, B 3 =0.3, B =0.6, B =0.8, B =1.0;C 代表种子萌发天数(d), C =5, C =7, C =9. 4 5 6 1 2 3 1997-02-18 收稿　　徐华松, 男, 32 岁, 讲师, 硕士 　 　22　 华　南　农　业　大　学　学　报 第 19 卷 1.3.2　均匀设计表的确定　实验设计时先不考虑因子间的交互作用, 根据方开泰和王元 2 1 (1994)的均匀设计表,选A U (6 ×3 )表, 故得设计表(见表1). 2.69 6 2 1 表1 　A U (6 ×3 ) 　　每种组合接种12 瓶,每瓶接种3 块外植