三个草本植物香根草类芦和芒草繁育体系的比较研究.DOCVIP

PAGE PAGE 9 三个草本C4植物（香根草、类芦和芒草）组培体系比较研究 马国华 张新华 吴国江 （中国科学院华南植物研究所 广州 510650） 摘 要： 香根草、类芦和芒草为中国南方常见的禾本科草本C4植物，均具有高光合特性和高的生物量以及抗逆性，在生物质能应用以及治理修复退化生态系统等方面有很大的运用前景。本文比较研究了三种植物组织培养繁殖技术，重点比较了这三种草本组织培养过程中体细胞胚的诱导和重复诱导及植株再生体系方面的异同点，其中香根草和类芦能够诱导体细胞胚胎发生，而对于芒草则不能诱导体细胞胚。研究结果表明生长素是诱导产生体细胞胚的关键因子，但不同植物种类及不同外植体对生长素浓度反应有差异。其中低浓度(1.0 mg l-1)的2,4-D或NAA能够诱导香根草嫩叶鞘产生体细胞胚，高浓度(4.0 mg l-1)的2,4-D能够诱导香根草芽基部外植体产生体细胞胚，而在此浓度下类芦只能诱导愈伤组织的形成，而在相对较低浓度2,4-D (1.0 mg l-1)或低活性生长素如NAA（1.0-10.0 mg l-1）的培养基上，它们两者的芽基部外植体均能够诱导愈伤组织和体细胞胚的形成，同时还存在体细胞胚直接萌发再生的情形。我们成功地在以上三种草本建立了离体培养体系和植株再生体系，为进一步研究其生物技术奠定了良好的基础。 关键词：香根草；类芦；芒草；繁育生物学；组培繁殖；植株再生 香根草、类芦和芒草为中国南方常见的禾本科C4草本植物，它们均具有很高光合特性和高的生物量以及抗逆性，在生物质能应用以及在水土保持和复合农林业中起重要的作用。香根草（Vetiveria zizanioides）为产于热带地区的禾本科多年生草本植物。由于香根草具有强大的根系、耐低pH和耐锰毒、铝毒、耐盐性、耐碱化土壤以及去污净化能力强、对环境有较强适应性，近几年受到国内外的广泛重视并得到迅速的推广[1，2]。类芦（Neyraudia arundinacea）是优良的水土保持草种，在中国南方的水蚀荒漠化地带采用以类芦为主草种的治理措施，半年时间即可覆盖地表，能有效地控制水土流失，快速改变水蚀荒漠化地区恶劣的生态环境，从而加快水蚀荒漠化地区植被恢复。可应用类芦快速绿化技术，成功地解决高岭土矿、金矿、煤矸石山等矿山废弃物地区的植被恢复性治理难题[3-6]。 近几年，化石能源的极度消耗以及急剧攀升的能源价格，使人类越来越需求发展新的能源[7-8]。一些生长快速的植物如芒草、类芦等已被列为理想的能源植物[9，10]。目前欧美等国已开始大面积种植“能源草”植物——芒草（Miscanthus sp），用于与煤混合燃烧发电[11，12]。其实芒草在我国南北到处都有分布，它根系发达，生长速度很快，一季可长3米高，割掉一茬很快又长起来，是值得我们重视的能源植物，应加以充分利用。 由于香根草、芒草不能够通过种子繁殖，组织培养快繁技术可以进行规模化的繁殖推广[13-17]。类芦植物可育，能产生种子并且可能任意传播，在世界范围内推广可能造成外来种生态入侵。因此在利用上有必要进行遗传改良特别是三倍体育种和体细胞变异等[18]。我们在三个草本植物建立组织培养体系的基础上[14，18]，比较了它们的一些异同点。 1. 材料和方法 供试材料香根草（Vetiveria zizanioides）、类芦（Neyraudia arundinacea）、芒草（Miscanthus floridulus）等来源于栽培于中国科学院华南植物园试验基地。拔起正常生长的香根草，剥取其基部白色嫩叶鞘作为外植体，经75%酒精消毒10s和0.1%升汞消毒8min后，以无菌水清洗三次后，将叶鞘切成0.5 cm2大小接种于含不同配比生长调节剂的MS[19]固体培养基上暗培养。固体培养基含琼脂6.0%，pH值为5.8，培养温度25?2℃。暗培养7d后，将培养瓶转移到光照条件（1100 Lux）下继续培养。观察外植体愈伤组织的诱导和器官发生等情况。而类芦和芒草的外植体来源于腋生芽或基生芽，将腋生芽或基生芽经75%酒精消毒10s和0.1%升汞浸泡处理10min，以无菌水清洗三次后，将腋生芽或基生芽切成1.0 cm长，接种于MS固体培养基（1.0 mg l-1 BAP和0.1 mg l-1 NAA）上光照培养并且繁殖继代。香根草嫩叶鞘外植体在诱导培养基上培养20 d后，将含有绿芽的愈伤组织转移到含1.0 mg l-1 BAP和0.1 mg l-1 NAA繁苗培养基上光照培养以诱导出芽。 1.1 生长调节剂对体细胞胚胎发生的作用 30 d后，切取试管苗基部0.5 cm长的一段组织，接种于不同生长调节剂配比的固体培养基上暗培养，诱导培养基分别含 4.0 mg l-1 2,4-D, 1.0 mg l-1 2,4-D