维生素D临床知识与产品培训教材.ppt

* 在间接法和夹心法ELSIA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。 * 校准品、质控品、样品均被样品稀释液稀释是样本准备。 辣根标记的25羟基维生素D3抗原-即是酶标抗原 包被了鼠单克隆抗体的微孔即是 固相的抗体 稀释的样本是待测VD3 TMB是显色剂，能在酶催化下反应显色 酶标仪测定的吸光度与酶催化的显色成正比，显色越明显，说明酶越多，酶标记的抗原即酶标记的VD3越多 因我们采用竞争法，所以显色越浅，说明待测样本中VD3越多 * 最好具备全套加样器或 移液器，常用的50、100、200、，10ul需特殊配备枪头，1000ul特大枪头 没有洗板机，需专业学习手动洗板方法 * 移液器： 1、选择量程和移液器最靠近或接近的； 2、吸取液体时，移液器要垂直，慢进慢出 3、同一溶液多次加样，若碰到样孔内壁，必须换枪头 * 维生素D3测试，大约要3小时，其中复溶干粉及混匀和恢复常温约20分钟，试剂准备-调制标准液体、质控液、样本液约15分钟。往包被板中加标准液、质控液、样本液、酶工作液（48孔为例）约20分钟。温育1小时，洗板干燥约15分钟，加底物约20分钟，温育15分钟，加终止液10分钟，测量1分钟共计约3小时。 * 注意：配制不同浓度的标准溶液就是变相的稀释部分4号标液，只需要4号标液和样本稀释液按不同比例混合，理解为主 * 在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。 指数方程下，Y代表OD值。 反过来，对数方程下，X代表OD值。 * * * 在“添加趋势线”选项卡中 –类型 选择 指数 选项中 选择 显示公式 显示R平方值 然后点击确定 * 显示的方程式一个指数方程，X代表横轴 代表液体浓度 Y代表浓度对应的OD值。最终可以根据所有酶标仪测量所得的OD值，根据方程反算出 质控液和测量样本的 VD3浓度 X=LN(Y/5.4619)/-0.4244这个方程中，5.4619为原方程中的E的系数，-0.4244为原方程E的指数 * 地方差异大 维生素D3检测试验数据案例 浓度=LN(OD值/3.3317)/-0.0165 中控=39.60482 高控=79.63643 （2）实验数据分析 数据记录和计算方法 数据处理软件 人工处理数据 人工数据处理步骤和方法 1、excel抄录酶标仪数据 2、选中全部数据，插入散点图 （2）实验数据分析 鼠标点击曲线—右键-选择添加趋势线 （2）实验数据分析 X=LN(Y/5.4619)/-0.4244 （2）实验数据分析 【参考值（参考范围）】 本公司采用的参考值范围： 19-57.6ug/l（47.5-144nmol/L） 每个实验室应建立自己的参考范围，本试剂盒检测结果仅作为辅助诊断手段之一，供临床医生参考。 （2）实验数据分析 【检验结果的计算与解释】 根据5个定标液数值，绘制标准曲线：以OD值为纵坐标，25-OH-D3浓度为横坐标，进行指数曲线拟合。 R不小于0.990，质控数值波动在正负20%。根据标准曲线和每个样本检测的OD值，在标准曲线上找到对应的25-OH-D3浓度值（ug/l或nmmol/L）。 1、19ug/l（47.5nmmol/L），说明25-羟基维生素D3不足， 2、57.6ug/l（144nmmol/L），说明25-羟基维生素D3充足。 （2）实验数据分析 【检验方法的局限性】 1、本试剂盒测定范围为5-100ug/l（12.5-250nmmol/L）。超出试剂盒测定范围的测定结果是通过校准品曲线外延得出的计算结果，不作为准确定量数据。使用前应先对样本进行稀释。诊断结果应结合患者的临床症状和医师其他的实验室检查进行分析。 2、加完终止液后应立即在酶标仪450nm、630nm处读数 （2）实验数据分析 （1）维生素D3检测操作规范 （2）维生素D3检测注意事项 4、维生素D3检测操作规范及注意事项 实验前 复温：将试剂及所需数量的微孔反应条和冻在冰箱内的血清标本置室温平衡（20-25℃）十分钟以上。 仪器准备：洗板机、酶标仪、恒温设备开启（37度） 洗涤液准备：蒸馏水配制洗涤液1：19稀释 标本：血清或血浆（当天最好） （1）维生素D3检测操作规范 实验中 复温：将试剂及所需数量的微孔反应条置室温平衡，试剂样品使用前必须达到室温（20℃-25℃）后才能使用，未用完的板条应立即用封片封好，避光冷藏保存； 复溶：质控品、定标品冻干粉用500ul蒸馏水复溶 五浓度标准品配制：五个系列定标品浓度的配制(见说明书) 41倍稀释：41倍血清样本的稀释和质控品的稀释 微孔板上排序有序，设好标准位，样品位，质控位 加样：加稀释后的样品，质控品，定标品50uL （1）维生素D3检测操作规