甘蓝型油菜抗苯磺隆突变体ALS基因分析与SNP标记-中国油料作物学报.PDF

中国油料作物学报 ２０１５，３７（５）：５８９－５９５ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｉｌＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅｓ ｄｏｉ：１０．７５０５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－９０８４．２０１５．０５．００１ 甘蓝型油菜抗苯磺隆突变体ＡＬＳ基因分析与ＳＮＰ标记 １，２ １，２，§ １，２ １，３ １，２ １，２ 孙妍妍 ，曲高平 ，黄谦心 ，吕金洋 ，郭　媛 ，胡胜武 （１．旱区作物逆境生物学国家重点实验室，陕西 杨凌，７１２１００；２．西北农林科技大学农学院，陕西 杨凌，７１２１００； ３．西北农林科技大学生命科学学院，陕西 杨凌，７１２１００） 　　摘要：为筛选新型甘蓝型油菜抗苯磺隆除草剂的等位基因特异分子标记，以ＥＭＳ诱变的甘蓝型油菜中双９号 Ｍ 群体（约３００００单株）为材料，通过苯磺隆喷药处理筛选到３株抗除草剂突变体（分别记为Ｋ１、Ｋ４、Ｋ５）。利用 ２ ＰＣＲ技术克隆到抗性突变体相应的ＢｎＡＬＳ１、ＢｎＡＬＳ２、ＢｎＡＬＳ３基因，序列分析结果表明，Ｋ１和Ｋ４的ＢｎＡＬＳ３基因序 列发生碱基突变，其中第＋５３５位Ｃ碱基突变为Ｔ，导致其编码的ＢｎＡＬＳ３蛋白第１９７位氨基酸由Ｐｒｏ突变为Ｓｅｒ；而 Ｋ５的ＢｎＡＬＳ１基因序列第＋５４４位Ｃ突变为Ｔ，导致其编码的ＢｎＡＬＳ１蛋白发生了Ｐｒｏ１９７Ｓｅｒ的改变（均以拟南芥 ＡＬＳ氨基酸序列为准）。其中Ｋ５抗性位点ＢｎＡＬＳ１∶Ｐｒｏ１９７Ｓｅｒ的改变属于首次报道。基于突变的基因序列设计了 ８对等位基因特异性ＰＣＲ引物组合，有６对能用于区分抗性突变体和野生型材料，其中可检测Ｋ５的ＢｎＡＬＳ１基因 ＳＮＰ位点的引物有２对，可检测Ｋ１、Ｋ４突变体ＢｎＡＬＳ３基因ＳＮＰ位点的引物有４对。 关键词：油菜；抗除草剂突变体；苯磺隆；乙酰乳酸合成酶；等位基因特异ＰＣＲ；单核苷酸多态性 中图分类号：Ｓ５６５．４０３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００７－９０８４（２０１５）０５－０５８９－０７ ＳＮＰｍａｒｋｅｒｓｆｏｒａｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅｇｅｎｅｓｆｒｏｍｔｒｉｂｅｎｕｒｏｎ－ｍｅｔｈｙｌｒｅｓｉｓｔａｎｔｍｕｔａｎｔｓｉｎＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ． １，２ １，２§ １，２ １，３ １，２ １，２ ＳＵＮＹａｎ－ｙａｎ ，ＱＵＧａｏ－ｐｉｎｇ ，ＨＵＡＮＧＱｉａｎ－ｘｉｎ ，ＬＶＪｉｎ－ｙａｎｇ ，ＧＵＯＹｕａｎ ，ＨＵＳｈｅｎｇ－ｗｕ （１．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｒｏｐＳｔｒｅｓｓＢｉｏｌｏｇｙｉｎＡｒｉｄＡｒｅａｓ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ７１２１００，Ｃｈｉｎａ； ２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ７１２１００，Ｃｈｉｎａ； ３．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ７１２１００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｆｏｒｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｆｏｒｔｒｉｂｅｎｕｒｏｎ－ｍｅｔｈｙｌ（ＴＢＭ）ｒｅｓｉｓｔａｎｔｍｕｔａｎｔｉｎＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．，Ｍ２ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｏｆｒａｐｅｓｅｅｄ（Ｂ．ｎａｐｕｓ）ｃｖＺｈｏｎｇｓｈｕａｎｇ９ｍｕｔａｇｅｎｉｚｅｄｂｙｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｂｙｆｏｌｉａｒ ｓｐｒａｙｉｎｇｏｆＴＢＭｓｏｌｕｔｉｏｎ．３ＴＢＭ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｍｕｔａｎｔｓ，Ｋ１，Ｋ４，ａｎｄＫ５，ｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｏｕｔｆｒｏｍａｂｏｕｔ３００００ｉｎｄｉ ｖｉｄｕａｌｓｏｆＭ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．ＢｎＡＬＳ１，ＢｎＡＬＳ２ａｎｄＢｎＡＬＳ３ｇｅｎｅｓｏｆｔｈｅｓｅＴＢＭｒｅｓｉｓｔａｎｔｍｕｔａｎｔｓｗｅｒｅｃｌｏｎｅｄａｎｄｄｅ ２ ｔｅｃｔｅｄｆｏｒｓｉｎｇｌｅｎｕｃｌｅａ