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;主要内容;酶工程制药概述;酶工程制药概述;酶工程制药概述;酶工程制药概述;白血病的概述与致病因素;白血病的概述与致病因素;白血病的概述与致病因素; 白血病的发病率 根据国外统计，白血病约占肿瘤总发病率的3%左右，是儿童和青年中最常见的一种恶性肿瘤。白血病的发病率在世界各国中，欧洲和北美发病率最高，其死亡率为3.2-7.4/10万人口。亚洲和南美洲发病率较低，死亡率为2.8-4.5/10万人口。 男性发病率略高于女性（1．81：1）。成人急性白血病中以急性粒细胞白血病最多见。儿童中以急淋白血病较多见。慢粒白血病随年龄增长而发病率逐渐升高;一、L-天冬氨酰胺酶的性质;二、L-天冬酰胺酶的结构;二、L-天冬酰胺酶的结构;二、L-天冬酰胺酶的结构;三、L-天冬氨酰胺酶的功能;一、L-天冬酰胺酶的修饰 1、微囊化修饰 将L-天冬酰胺酶用半透膜性质的聚合物制成微囊型固定化酶。其大小一般为1～ 500Lm。 低分子底物可以自由出入胶囊膜, 与酶接触而起反应, 反应产物则因浓度不断增加而不断渗透出胶囊外面。 囊型固定化可以克服天然酶针剂出现的抗体抗原反应。该固定化酶注射到人体后, 对膜具有良好通透性的低分子底物能长时间发挥作用, 比天然酶的疗效好, 而且急性毒副反应也较低。; 2、L-天冬酰胺酶的聚乙二醇化 L-ASP的聚乙二醇化不但降级了胰蛋白酶对它的降解作用，而且修饰酶的抗原性与天然酶相比也大为下降。此外，聚乙二醇化L-ASP与传统的脂质体化L-ASP相比与有明显的优势。 ;L-天冬酰胺酶的修饰及作用机制;L-天冬酰胺酶的抗肿瘤作用：;L-天冬酰胺酶的生产工艺;L天冬酰胺酶的生产工艺;天冬酰胺酶工艺流程图 ;工艺过程及要点;一、总述;5 硫酸铵分级沉淀 取上述酶液，加入（NH4)2SO4至55%饱和度，调PH至7.0，室温搅拌1h，离心除去沉淀，取上清液加入（ NH4)2SO4到90%饱和度，离心收集沉淀。 6 L-天冬酰胺酶的分离纯化 将沉淀用50mmol/L,PH7.0磷酸缓冲液溶解并透析，透析后的酶液，通过预先用10mmol/L，PH7.6磷酸缓冲液平衡的DEAE-纤维素层析柱（1cm×30cm）,用30mmol/L磷酸缓冲液洗脱，流速为40mL/h,收集天冬酰胺酶活性组分，再调整PH4.8,通过预先用50mmol/L,PH4.9的磷酸缓冲液平衡的CM-纤维素层析柱（1cm×8cm）,用50mmol/L,PH5.2的磷酸缓冲液洗脱，收集酶活性组分，冷冻干燥，即得L-天冬酰胺酶冻干粉，总收率为31%，比活为220U/mg蛋白。; Erwinase获准用于治疗对大肠杆菌源性天冬酰胺酶过敏的急性淋巴细胞性白血病患者 2011年11月18日，EUSA制药和美国食品药品管理局(FDA)宣布孤儿药Erwinase获准用于治疗对大肠杆菌源性的天冬酰胺酶有超敏反应的急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者。 Erwinaze是一种可降低循环血液中天门冬酰胺水平的天冬酰胺酶。天门冬酰胺是细胞生长的必需氨基酸，将其从血液中清除可抑制ALL相关细胞的生长。天冬酰胺酶产品来源于细菌，近15%~20%的患者可对大肠杆菌源性的现代制剂产生超敏反应因而无法持续治疗。Erwinaze是由欧文氏菌产生的，在免疫学性质上有别于原有的制剂，适用于对大肠杆菌源性治疗有超敏反应的患者。 FDA批准Erwinase是基于相关的多项临床试验结果，共涉及630例ALL患者。在一项纳入58名受试者的关键性疗效研究中，100%的可评估患者达到了天冬酰胺酶活性主要终点。 Erwinaze的不良反应：过敏反应、胰腺炎、转氨酶和胆红素水平升高、血栓形成、出血、高血糖症、恶心和呕吐。 ; 2、静脉注射天冬酰胺酶对于55岁左右新诊断急性成淋巴 细胞白血病诱导缓解期治疗的药效动力学以及安全性 与儿童相比，天冬酰胺酶成人治疗的药代动力学、药效学以及安全性信息非常有限。研究人员采用单次静脉注射天门冬酰胺酶(2000 IU/m(2))作为25例成人患者诱导缓解的线药物，并在几个时间点获得血清样本。结果可见，天门冬酰胺酶活性血清峰浓度的总体均值为1 IU/ml，消除半衰期为7天，分布容积为2.43 L/m(2)。单剂量给药后，患者2小时后完全去氨基，并分别在14、21和28天完成100%、81%和44%。 药效动力学相关模型显示，0.2 IU/ml的最小酶活性最适天门冬