人椎间盘髓核来源的诱导多能干细胞重编程及功能的-心肌细胞培养基.PDFVIP

ResearchPapers研究报告 生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biophysics 2017, 44(7): 591~600 人椎间盘髓核来源的诱导多能干细胞 重编程及功能的研究* ) ) ) ) ) ) ) )** 1 1 1 2 1 1 2 1 吴张松 罗志强 张明裕 廉翠红 林欣燕 梁雨虹 顾洪生 朱艳霞 1 2 ) ) ( 深圳大学医学部，深圳518060； 深圳大学附属第一医院脊柱外科，深圳518060) 摘要 椎间盘退变始发于髓核组织，获得足够有功能的髓核细胞是研究及治疗椎间盘退变的关键．而人诱导多能干细胞 (induced pluripotent stem cell ，iPSC)不仅为建立疾病模型以研究疾病发生发展机制开辟了道路，还在再生医学领域展现出了 广阔的应用前景．我们首先从椎间盘退变患者微创手术获得的髓核组织内分离髓核细胞，将携带OCT3/4、SOX2、KLF4 和 c-MYC 的仙台病毒(Sendai virus，SeV)转染髓核细胞，重编程获得iPSC ．通过检测多能细胞特异性标志、体内成瘤实验、甲 基化及核型分析对所获得的iPSC 进行鉴定．并以皮肤成纤维细胞来源iPSC 作为对照，在二维和三维水凝胶中对iPSC 进行 定向分化，检测髓核细胞相关蛋白和基因的表达，比较分析2 种iPSC 向髓核细胞的分化效率．结果显示，iPSC 能表达多能 细胞特异性标志，具有正常的二倍体核型，畸胎瘤实验显示三个胚层的出现．诱导分化后的iPSC 表达髓核相关基因和蛋白， 在水凝胶中诱导培养后，iPSC 表达更多的髓核相关基因和蛋白．髓核来源的iPSC 与成纤维细胞来源的iPSC 相比，可表达 更多的髓核相关基因和蛋白．本研究首次将患者退变髓核细胞重编程成iPSC ，并在水凝胶内将其诱导分化为髓核样细胞， 为椎间盘退变个体化细胞治疗奠定基础． 关键词 椎间盘退行性疾病，髓核，诱导多能干细胞，重编程，分化 学科分类号 R3 ，Q2 DOI: 10.16476/j.pibb.2017.0160 椎间盘髓核组织主要由髓核细胞及 型胶原构 诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell ， Ⅱ 成，富含蛋白聚糖，呈凝胶状，维持椎间盘的正常 iPSC)是由体细胞重编程而获得的具有与ESC 类似 形态和静水压力，承载脊柱运动与关节活动应力从 生物学特性的多能干细胞，避免了临床应用ESC 而实现生物学效应．椎间盘退变(disc degenerative 所带来的伦理学问题的同时，还可为临床患者提供 disease ，DDD)主要从髓核退变开始[1-2] ，伴随DDD 个体化治疗．现已发现，多种不同组织来源的细胞 发生，髓核组织发生纤维化，髓核细胞(nucleus 可以重编程为人iPSC[5-7] ，并分化成特异性组织类 pulposus cell ，NPC) 数量进一步减少，细胞外基质 型的细胞，在动物疾病模型建立、新药研制及细胞 合成能力下降[2] ．最后髓核向外突出，引起患者下 治疗等领域展现出了广阔的应用前景． 腰背疼痛． 然而，疾病组织细胞的获取并非都很容易，而