白头翁组培快繁技术规程.DOCVIP

LY/T ××××—2011 PAGE II PAGE 1 黑龙江省市场监督管理局 发布××××-××-××实施××××- 黑龙江省市场监督管理局 发布 ××××-××-××实施 ××××-××-××发布 白头翁组培快繁技术规程 DB23/T ××××—2018 DB23 黑龙江省地方标准 ICS 65.020.01 B 64 DB23/T ××××—2018 PAGE I 前 言 本标准依据GB/T 1.1-2009的编写规则起草。 本标准由黑龙江省森林工业总局提出。 本标准起草单位：黑龙江省林业科学研究所。 本标准主要起草人：舒钰、宋国华、李晶、王丹、王福德、赵学丽、王颖、王晓荣、黄金龙。 PAGE 1 白头翁组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了白头翁（Pulsatilla chinensis （Bunge）Regel）种苗组培快繁技术的培养基制备、外植体选择与处理、诱导分化与增殖、生根培养、炼苗与移栽和技术档案。 本标准适用于白头翁组培快繁技术。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 LY/T 1882 HYPERLINK /kns/detail/detail.aspx?QueryID=15CurRec=4dbcode=SCSDdbname=SCSDfilename=SCSDLY/T%201882-2010 \t _blank 林木组织培养育苗技术规程 3 培养基制备 3.1 培养基 不定芽诱导分化培养基：MS基本培养基+6-BA 0.5 mg/L+GA31.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L，pH调至5.8。 增殖培养基：MS基本培养基+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L，pH调至5.8。 生根培养基：MS基本培养基+KT 0.5 mg/L +NAA 1.5 mg/L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L，pH调至5.8。 3.2 培养基灭菌 瓶装培养基需在10 h内完成灭菌，采用高压蒸汽灭菌锅灭菌，在压力0.105 MPa、温度121 ℃条件下灭菌20 min～25 min。 3.3 培养基保存 灭菌后的培养基放入接种室，常温条件下保存7d内使用，2 ℃～4 ℃条件下保存14 d内使用。培养基应保存于洁净环境中，注意避光和防尘。 4 外植体选择与处理 4.1 外植体的选择 择生长健壮、无病虫害的植株作为采样母株，剪取幼枝茎段作为外植体，外植体大小在2 cm～4 cm之间。 4.2 外植体灭菌 先将外植体用洗涤剂作表面清洗，将外植体用流水冲洗30 min后，放入消毒瓶中。把装有外植体的消毒瓶用75%的酒精棉擦拭后放入超净工作台，在超净工作台上打开装有外植体的消毒瓶，倒入75 %酒精并摇晃消毒瓶，浸泡消毒30 s，倒去酒精，用无菌水冲洗外植体3次～5次；然后用0.1 % HgCl2浸泡5 min，无菌水冲洗4次～5次，并浸泡30 min，再用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。 4.3 外植体切割 将表面消毒后的外植体切割，两端各剪去2mm，保持茎段长度1.5 cm～2.5 cm，接种至诱导分化培养基中。 5 诱导分化与增殖 5.1 培养条件 培养室的温度控制在25 ℃±3 ℃，相对空气湿度控制在70 %～80 %，光照强度为27 μmol?m-2?s-1～36 μmol?m-2?s-1，光照时间为12 h/d。 5.2 诱导分化 先将培养瓶的封口膜轻轻取下，放在一边，将培养瓶口倾斜在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒。将枪式镊子在酒精灯上灼烧消毒并冷却后，将切割好的外植体放入不定芽分化诱导培养基中，每个培养瓶放3个外植体，接种后盖上封口膜，并标注日期。 5.3 增殖培养 外植体经诱导分化培养生成愈伤组织及不定芽，将其转接至增殖培养基中，继代培养30 d～35 d，培养条件同5.1。 6 生根培养 选取培养瓶中长度1.5 cm～3.0 cm生长健壮的不定芽接种至生根培养基中，培养20 d～30 d，培养条件同5.1。 7 炼苗与移栽 7.1 炼苗 7.1.1 炼苗标准 当组培苗基部长出3条以上，长度达1.0 cm～3.0 cm的根系，即可进行炼苗处理。 7.1.2 炼苗方法 将组培苗转移到日光温室中，自然散射光下炼苗，温度控制在20 ℃～25 ℃，空气相对湿度在70 %～80 %，每天中午在培养瓶周围喷洒雾水。3 d后揭去封口膜，2 d～4 d后即可移栽。 7.2 移栽 取出组培苗，用清水洗去苗基部的培养基，移