过继转输不同来源父系淋巴细胞诱导妊娠丢失孕鼠T细胞免疫耐受机制的研究-妇产科学专业论文.docxVIP

目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 7 研究论文过继转输不同来源父系淋巴细胞诱导妊娠丢失孕鼠T细胞免 疫耐受机制的研究 前言fjlJ吾 ． ．．114 材料与方法 1 4 结果 20 附图 24 附表 43 讨论 46 结论 49 参考文献 50 综述复发性自然流产的临床病因研究进展 53 致谢 72 个人简历 73 中文摘要过继转输不同来源父系淋巴细胞诱导妊娠丢失 中文摘要 过继转输不同来源父系淋巴细胞诱导妊娠丢失 孕鼠T细胞免疫耐受机制的研究 摘 要 目的：在正常妊娠过程中，胎儿作为半同种异体移植物而未被母体排 斥，实际上反映了母体对胚胎的免疫耐受。其中，受孕后母体外周及母． 胎界面免疫细胞功能变化是维持母胎免疫耐受平衡状态的关键。目前国内 外研究多采用父方淋巴细胞免疫治疗不明原因复发性流产(Unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA)，但是尚存在细胞来源不稳定、规 范程度不高、个体之间差异较大、各实验室疗效不一等不足，且有关其免 疫作用机制尚存疑点和分歧。 本研究通过分析母体T细胞功能变化与妊娠丢失之间的关系，探讨 过继转输不同来源的父系外周淋巴细胞进行免疫干预后，对妊娠丢失孕鼠 母胎免疫耐受的诱导作用，为进一步研究URSA的免疫学发病机制及下 一步指导临床合理规范化进行过继免疫治疗提供实验基础和理论依据。 方法： 1建立妊娠丢失实验动物模型及实验分组：将雌雄小鼠随机分为5组后按 2：1合笼交配；CBA／J(早)×DBA／2(6)为URSA组，CBA／J(早)×BALB／e(6) 为正常妊娠对照组。再将URSA组的3组CBA／J雌鼠于孕4天(着床期) 分别给予尾静脉注射父方(同笼DBA／2雄鼠)、非父方(非同笼DBA／2雄 鼠)、无关个体(BALB／c雄鼠)外周单个核细胞，分别为治疗I组、II组、 Ⅲ组；第4组CBA／J雌鼠注射等量生理盐水，作为未经免疫干预的URSA 组。 2胚胎发育情况观察：于妊娠第14天分别处死各组CBA／J孕鼠，测量胎盘 体积、计数吸收胚胎数和存活胚胎数，计算胚胎吸收率及流产发生率。 3孕鼠外周T细胞免疫功能检测：妊娠第14天分别处死各组CBM孕鼠， 无菌解剖取脾，制备单个细胞悬液。采用噻唑蓝(MTr)染色法检测ConA 诱导T细胞转化的彳彳92值；细胞经破膜处理后直接荧光标记流式细胞计 数(FCM)分别检测Thl型细胞因子IL．2、IF：N．Y以及Th2型细胞因子也-4、 中文摘要IL-10的表达。 中文摘要 IL-10的表达。 4孕鼠母胎界面免疫抑制状况的分析：妊娠第14天分别处死各组CBA／J 孕鼠，无菌解剖取胎盘组织，制备石蜡包埋切片。HE染色后光镜下分别 以矩形走形计数200个免疫细胞，计数大颗粒淋巴细胞(LGL)，小淋巴 细胞，巨噬细胞(Mtp)等，计算各类免疫细胞的百分率。免疫组化染色 后进行图像分析，以灰度值(GS)分析TGF．B l、IL．10、COX一2等免疫 抑制分子的表达强度，GS值大小与阳性表达强度呈反比；光镜下以矩形 走形计数200个细胞，分别计算阳性细胞百分率。 5统计学处理：应用SPSSl3．0版本软件对各组数据进行正态性、方差齐 性检验后，以卡方检验比较各组之间胚胎吸收率及胎盘组织阳性细胞百分 率之间的差异，单因素方差分析比较各组孕鼠脾细胞中Thl／Th2型细胞因 子、胎盘组织免疫抑制分子的表达是否存在差异。 结果： 1过继转输不同来源父系淋巴细胞对妊娠丢失孕鼠胚胎发育的影响 妊娠丢失孕鼠(URSA组)的胚胎吸收率为22．58％，而正常妊娠动物模 型孕鼠(Control组)的胚胎吸收率为5．23％，过继转输父系淋巴细胞治疗I、 II、Ⅲ组胚胎吸收率分别为5．50％、5．17％、5．84％；与未经治疗的URSA 组相比，治疗I、II、Ⅲ组胚胎吸收率均显著下降(均P0．05)；三组组间 比较无明显差异(P0．05)，且均下降至正常妊娠对照组水平(均P0．05)。 URSA组的流产发生率为44％，而Control组的流产发生率为20％。 过继转输父系淋巴细胞治疗I、II、Ⅲ组流产发生率分别为24％、16％、 20％；与未经治疗的URSA组相比，治疗I、II、Ⅲ组流产发生率显著下 降(均P0．05)，三组组间比较无明显差异pO．05)，且均下降至正常妊娠 对照组水平(均P0．05)。 2过继转输不同来源父系淋巴细胞对妊娠丢失孕鼠外周T细胞免疫功能 的影响 2．1 ConA诱导T淋巴细胞转化功能检测 未经ConA诱导转化时，与未孕CBA／J雌鼠脾细胞培养72h后彳优值 (O．1984-0．074)相比较，正常妊娠组(Control组)、未经诱导的URSA组 及三组经父系细胞免疫干预的治疗组孕鼠脾细胞的彳492值均