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- 2019-04-05 发布于湖北
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HPLC的保养和故障排除;HPLC的日常操作条件;泵的使用与维护注意事项;流动相的选择;溶剂的等级
HPLC级
优级纯
分析纯;溶剂纯度的影响;缓冲液的使用;流动相的过滤; 脱气
目的:除去流动相中因溶解或混合而产生的气泡
产生原因:
温度上升
压力下降
溶剂混合
;流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯容器中,不能贮存在塑料容器中。
容器一定要盖严,防止溶剂挥发引起组成变化,也防止氧和二氧化碳溶入流动相。
磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉,应临用现制。
容器应定期清洗,以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。;流动相过滤头产生的问题;流路中形成气泡引起的问题;1. 使用流动相溶解样品
-- 减少溶剂峰,尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重要
-- 保证样品在流动相中的溶解度,避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀
2. 进样前最好使用0.45um 的膜进行过滤
如果样品很脏,要使用0.2um的膜进行过滤;梯度洗脱;注意事项:
溶剂的纯度要高,否则梯度洗脱的重现性差,进行样品之前必须进行空白梯度洗脱 ,以辨认溶剂杂质峰。
梯度混合的溶剂互溶性要好
梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器(如紫外吸收检测器或荧光检测器),而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器(如示差折光检测器)
每次梯度洗脱之后要对色谱柱进行充分的平衡。;溶
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