绿豆酸性磷酸酶的分离纯化和部分性质研究.pdfVIP

2011年5月 中国粮油学报 V01．26，No．5 JournaloftheChineseCerealsandOilsAssociation 2011 第26卷第5期 May 绿豆酸性磷酸酶的分离纯化和部分性质研究 高亚朋 苏 茉 梁建荣 黄 洁 唐云明 (西南大学生命科学学院重庆市甘薯工程研究中心三峡库区生态环境教育部重点实验室，重庆400715)) 液比活力为347．0 U／mg。凝胶过滤法测定酶分子质量为34．6 ku。证明绿豆酸性磷酸酶为单亚基酶。该酶最适pH为5．2ku，最适温度为40℃。以pNPP作底物时K。为 为：Hg“Cu2+Pb“Zn“。K+，Ca“对酶影响不明显。 关键词绿豆酸性磷酸酶分离纯化性质 中图分类号：Q556文献标识码：A 文章编号：1003—0174(2011)05—0092—05 酸性磷酸酶(Acidphospoatase，简称ACP，E．e．芽48h。将萌发的绿豆种子按1：4加入预冷的 50mmol／L mmol／L 3．1．3．2)，是一组在酸性条件下可将底物中的磷酸 5．0，含2 HAc—NaAc缓冲液(pH mmoL／L mmol／L 单酯键水解释放出无机磷的巯基酶，在生物磷代谢 MgCl2，10 ME，2 EDTA)，匀浆过滤， 中起着重要作用¨】。ACP不仅与生物的生长调节、 000 抽提2h，滤液离心(12 r／min，10rain，4℃)后的 代谢调节及信号转导等方面的生理机能关系密切， 上清液即为粗酶液。 亦能增强植物对缺磷、干旱、低温等逆境的抗性，因 1．2．1．2硫酸铵分部盐析 此近年被广泛重视悼。4J。但由于ACP通常具有非绝 粗酶液置于恒温磁力搅拌器上，缓慢加入干燥 对专一性瞪1和存在多种同工酶旧J，其具体的生理生 硫酸铵粉末至20％饱和度。4℃静置2h，离心 000 化功能尚有待研究。综于以上原因，研究开发来源 (12 r／min，15min，4℃)，弃沉淀；依据上述方法， 丰富的植物ACP具有重要意义。本试验以成本低且 将离心上清液加入干燥硫酸铵粉末至70％饱和度，4 000 耐旱、耐瘠、也耐酸、耐碱的绿豆种子为研究材料，分 ℃静置2h，离心(8 r／min，20min，4℃)，弃上清； 离纯化了ACP，并对其部分酶学性质进行了研究，以 沉淀用50mmol／L 5．0，含 HAc—NaAc缓冲液(pH 2mmol／L 期为进一步研究ACP提供理论参考及对作物遗传改 ME)悬浮，检测ACP的蛋白质含量和酶活 良提供有益帮助。 mol／L5．0HAc— 力，之后装入透析袋中，在0．005 pH mol／L