番茄雄性不育基因的克隆及序列分析.pdfVIP

新疆农业科学2015，52(11)：2035—2042 Sciences XinjiangAgricultural 1．012 doi：10．6048／j．issn．1001-4330．2015．1 番茄雄性不育基因的克隆及序列分析 王柏柯，李宁，唐亚萍，王强，杨涛，杨生保，帕提古丽，余庆辉 (新疆农业科学院园艺作物研究所，鸟鲁木齐830091) 摘要：【目的】克隆番茄雄性不育基因，明确番茄雄性不育基因的突变信息。【方法】以番茄雄性不育系材料 为试材，通过同源克隆的方法，将4个雄性不育的候选基因进行克隆。【结果】有3个候选基因在雄性不育系 与可育系之间发生了突变，第一个突变基因Solyc9001的序列全长为2473 bp，只在925bp处发生了一个单位 288 点突变，由G颠换为A；第二个基因Solycg002的序列全场为4bp，有3个位点发生了单位点突变，分别为 l 194处C颠换为A、1211处A颠换为G、1 529处T颠换为C；第三个突变基因Solycg003的序列全长为3 479 bp，有4个位点发生了单位点突变，分别为849 bp处T颠换为C、1855处C颠换为A、1877处插入了一个 C和2 123处A颠换为G。通过生物信息学分析发现第一个基因Solyc9001是一个剪切体蛋白基因；第二个基 研究的进展，植物的雄性不育是由于淀粉及可溶性糖的代谢异常引起的，初步判断第二个基因Solyc9002为不 育目标基因。 关键词：番茄；雄性不育；基因克隆；序列分析 中图分类号：S641．2 文献标识码：A 文章编号：1001—4330(2015)11—2035—08 达量，可在转录组水平和蛋白组水平进行调控。 0 引言 TweU等H o通过差异性筛选法克隆了4个在成熟 【研究意义】随着分子生物学理论和技术的 花粉粒中特异表达基因：分别为LA／51、LA／52、 发展，番茄(Solanum lycopersicurn)雄性不育的研LA／58、LAT59，这4个基因均为晚期基因，在有丝 究已经从细胞学、形态学、生物化学逐渐转向了分 分裂后期开始转录表达，且当花开时这4个基因 子生物学。目前利用形态学标记或分子学标记， 的表达量达到最高。Northern杂交结果显示，这4 已经基本将各种不同类型的番茄雄性不育基因定 个基因的mRNA不但在花粉粒中表达，而且在花 位到了各条染色体上【lj。但番茄雄性不育基因 药中也有一定量的表达Hj。另外，Smith等哺3也 的克隆一般都利用正向遗传学方法，其耗时耗力， 通过差异性筛选在绒毡层中克隆了一个基因 克隆过程比较繁复，所以现有的研究成果中鲜有 108，其只有在减数分裂的晚期才开始表达，而其 已克隆的番茄雄性不育基因的报道，研究将通过 表达峰值出现在花芽长8～9rrllrl时。所以基因 大量的生物信息学数据，利用同源克隆的方法克 108的表达可能与绒毡层的物质代谢、花粉外壁 隆番茄雄性不育基因，大大简化了基因克隆的程 蛋白沉积及营养供给有关。【本研究切入点】研 序。【前人研究进展】有学者尝试从转录表达水 究以一个番茄的核雄性不育系为材料，通过前期 平阐述雄性不育基因的功能机理，刘忠松等¨3研 分子标记定位及精细定位，将这个番茄雄性不育 究发现：花粉小孢子的发育是多个基因在一