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雷公藤甲素致大鼠横纹肌溶解实验探究 中药雷公藤药材及其制剂在临床广泛用于类风湿性 关节炎、肾病综合征、银屑病、湿疹样皮炎及其他自身免疫 性疾病的治疗，而雷公藤甲素(雷公藤内酯醇，triptolide, TP)是从雷公藤根皮中提取的一种具有松香烷结构的三环 氧二菇内酯类化合物，具有多种生物活性［1］。现代研究表 明，TP不仅有抗类风湿性关节炎作用，还有抗癌、抗排异、 抗糖尿病肾病、抗足细胞损伤诱导肾病综合征、抗肺炎、抗 脊髓损伤、抗帕金森氏病、抗溃疡性结肠炎、抗免疫性肠病 以及抗人骨髓增殖性疾病等广泛的药理作用，其中尤以抗癌 活性最为突出［2-7］ o但其毒不良反应也不容忽视，研究表 明，TP存在明显的肝毒性、肾毒性、生殖毒性和心肌毒性［8］ o 本实验通过对TP干预后大鼠骨骼肌组织及血清生化指标的 研究，探讨横纹肌溶解毒性的产生与TP的相关性，为临床 安全有效使用雷公藤制剂提供其可能存在安全隐患的数据 及依据，对避免横纹肌溶解(RL)相关的临床急诊事件的发 生具有重要意义。 1材料与方法 1. 1实验动物 SD大鼠40只，雌雄各半，体质量(180±20) g,清洁 级，由浙江省医科院实验动物中心提供，动物许可证号为 SCXK （浙）2008-0233o动物饲养条件：温度（23±2） °C, 自由饮食饮水，照明时间12 h/d,适应性饲养1周后进行实 验。 1.2仪器与试剂 低温冰箱（日本三洋公司）；低温4°C离心机（Thermo Scientific，德国）；LD-1001型电子天平（沈阳龙腾电子称 量仪器有限公司）；SynergyHT多功能酶标仪（美国BI0TEK 公司）；Olympus光学显微镜；透射电镜（Hitachi TM-1000, 荷兰）。 雷公藤甲素标准品由中国药品生物制品检定所提供；大 鼠肌红蛋白ELISA试剂盒（美国RB公司）；ZB3-CK-J肌酸 激酶试剂盒、H16L-C018乳酸脱氢酶试剂盒均由杭州艾迪康 医学检验中心提供。2. 5%的戊二醛溶液，1%和2%餓酸，0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH7. 0）o 1.3动物分组和模型制备 40只SD大鼠随机（随机数字法）分为4组：健康对照 组、高剂量组（4 mg/kg）＞中剂量组（2 mg/kg）及低剂量 组（1 mg/kg）,每组10只。各组灌胃给药前禁食12 h,除 健康组动物给予等量生理盐水灌胃以外，其余各剂量组动物 按0. 8 ml/100 g 一次性给予高、中、低不同浓度药物。给 药后24h、48h时，以剪尾法获取各组大鼠静脉血，于4 °C, 3000 r/min离心15 min分离血清，-20 °C冷冻，以备生化 指标检测。给药后48 h取静脉血后将全部动物以10%水合氯 醛(1 ml/kg)麻醉并处死，分离横切大鼠两侧后肢股外侧 肌肉组织约0.5 cm厚的组织块，一部分用10%中性甲醛固定 以备病理检查；另一部分用2. 5%戊二醛固定，以备透射电镜 观察大鼠骨骼肌超微结构用。 1. 4指标检测 1. 4. 1血清生化指标测定 采用Olympus全自动生化仪 测定大鼠血清肌酸激酶(CK)、肌肝(Cr)、乳酸脱氢酶(LDH) 的质量浓度值。 1.4.2肌红蛋白含量测定 以酶联免疫分析法(ELISA) 测定大鼠肌红蛋白(Mb)含量，采用双抗体夹心法测定，Mb 的标准曲线为y=679. 48x+49. 428 (R2=0. 9972 )，如图1所示。 1.4.3骨骼肌病理组织学检查 分离的组织块以10%中 性甲醛固定，石蜡包埋并切片，常规HE染色，光镜下观察。 1.4.4骨骼肌超微结构观察 分离的组织块在2. 5%的戊 二醛溶液中固定，经漂洗、娥酸固定、再漂洗、乙醇梯 度脱水、包埋剂梯度渗透，70工加热，得包埋好的样品。 经Reichert超薄切片机切片，柠檬酸铅溶液和醋酸双氧铀 50%乙醇饱和溶液各染色15 min,即可在透射电镜下观察。 图1肌红蛋白(Mb)的标准曲线 1. 5统计学方法 采用SPSS 11.5统计软件包处理，计量资料以均数土标 准差（x ±s）表示，组间比较釆用单因素方差分析（LSD-t 法）。以P0. 05）；给药后48 h时，各剂量组大鼠血清CK值 均较给药24 h时有所降低，与健康对照组血清CK值比较， 差异无统计学意义（P0.05）；各给药组大鼠血清Cr值与健 康对照组比较，则无论在任何时间点差异无统计学意义 （P0. 05）o 见表 lo 表1各组大鼠给药后24 h、48 h时血清LDH、CK、Cr 水平比较（n=10, x ±s） 注：与健康对照组比较，aPO. 05）o见图2。 与健康对照组比较，aP 光学显微镜下观察可见， 健康对照组大鼠的肌肉组织无明显病理改变；而用药后48h 时大鼠肌纤维肿胀，周围可见少量的炎