不同浓度芦荟多糖对外周血单个核细胞和HepG2生长.pdf

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2009 年 5月 第 11 卷 第5 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine May 2009 Vol. 11 No. 5 药理研究 不同浓度芦荟多糖对外周血 单个核细胞和HepG2生长的影响 1 1* 2 苗艳艳 ,黄兆胜 ,危建安 (1.广州中医药大学,广东 广州 510405; 2.广东省中医院中心实验室,广东 广州 510000) [ 摘要 ] 目的:为芦荟多糖的抗肿瘤作用研究提供实验用细胞模型,筛选最佳干预药物及其浓度。方法:采 用人淋巴细胞分离液,Ficoll Hypaque密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),Alamar Blue法观察芦荟 多糖对 PBMC生长的影响,四唑氮蓝(Methylthiazoletrazolium,MTT)法观察芦荟多糖对HepG2生长的影响。结果: 密度梯度离心法成功分离 PBMC。芦荟多糖AP11 在 200μg·mL-1 时已较明显促进和维持 PBMC 的生长(P 0.01), -1 各不同浓度芦荟多糖对 HepG2 的生长无显著影响(P 0.05)。结论:芦荟多糖AP11(200μg·mL )可作为开展抗 肿瘤作用机理的理想实验用药。 [ 关键词 ] 芦荟多糖;原代培养;外周血单个核细胞;HepG2;药物筛选 芦荟多糖的抗肿瘤作用已得到多项研究证实, 数码照像机(日本尼康公司)。 其抗肿瘤作用效果明确,且与其免疫调节功能密切 1.3 其他 相关。研究表明,芦荟多糖的抗肿瘤作用与其促进 人体新鲜外周静脉血,由健康自愿者提供;人肝 T 细胞、巨噬细胞活化等有关。库拉索芦荟多糖抗 癌细胞HepG2,由广州中医药大学生化实验室提供。 肿瘤活性的强弱与其分子量的大小有关,分子量越 2 方法 大,其抗肿瘤活性越强。本文以 PBMC、HepG2 为 2.1 PBMC的原代培养 实验用细胞模型,观察了不同分子量芦荟多糖对免 2.1.1 PBMC 的分离制备 取供血者的肝素抗凝血 疫细胞及肿瘤细胞生长的影响,以期筛选出芦荟多 12mL,加入等体积 RPMI1640 培养液混匀,移液 糖抗肿瘤作用研究的理想实验用药。 管吸取稀释血液 6mL,距淋巴细胞分层液液面上 1 材料 约 1cm 处沿管壁轻轻叠加于 3mL 淋巴细胞分离液 1.1 药物与试剂 上,保持淋巴细胞分层液与血样品之间的界限清晰, 芦荟多糖 AP11、AP12、AP13,由本实验室提 2000r·min-1 离心20min后,液体分为4层,吸取第 取;Hanks液、RPMI1640培养基、胰蛋白酶、台盼蓝, 二层白膜状的单个核细胞层,加入 5 倍量的磷酸盐 均购自广州威佳科技有限公司;胎牛血清购自Gibico 缓冲液(PBS)洗涤 2 次,每次 1 000r·min-1 离心 公司;四唑氮蓝、二甲基亚砜购自美国 Sigma 公司; 10min,最后一次离心后将沉淀的细胞用完全培养基 人淋巴细胞分离液(LTS1077)购自天津灏洋生物制 (含 10% 胎牛血清的RPMI1 640 培养液)配成单细 品科技有限责任公司。

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