中药质量标准分析方法验证指导原则nn.pptVIP

2、含量测定和限量检查 以不含被测成分的供试品（除去含待测成分药材或不含待测成分的模拟处方）实验说明方法的专属性。色谱法、光谱法等应附代表性图谱，并标明相关成分在图中的位置，色谱法中的分离度应符合要求。必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行峰纯度检查。 ▉ 检测限：指供试品中被测物能被检出的最低量。该指标的意义在于考察方法是否具备灵敏的检测能力，特别是微量有害杂质的检查应证明其方法具有足够低的检测限，以保证检出需控制的杂质。如化学原料药中的有机溶剂残留量、中药中马兜铃酸的检查等，均应对检测限进行考察。 确定检测限有两种方法： （1）、直观法 用一系列已知浓度的供试品进行分析，试验出能被可靠检出的最低浓度或量。仪器或非仪器方法均可使用。 （2）、信噪比法 仅适用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度供试品测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比为3：1或2：1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限。 （3）、数据要求 应附测试图谱，说明测试过程和检测限结果。 ▉定量限：定量限系指供试品中被测成分能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定准确度和精密度。用于限量检查的定量测定的分析方法（如以5-羟甲基糠醛为对照品测定葡糖糖注射液中5-羟甲基糠醛的量、以马兜铃酸A为对照测定含量等）应确定定量限。 常用信噪比法确定定量限。一般以信噪比为10：1时相应浓度或注入仪器的量进行确定。 ▉ 线性：线性系指在设计的范围内，测试结果与供试品中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 应在规定的范围内测定线性关系。可用一储备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列供试品的方法进行测定，至少制备5个浓度的供试品。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算（如采用蒸发光散射检测器需取响应值的对数）。 数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图。 ▉范围：范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果及要求确定。一般来说，线性范围窄、精密度要求高，范围就相应较窄。对于有毒的、具特殊功效或药理作用的成分，其范围应大于被限定含量的区间。溶出度或释放度中的溶出量测定，范围应为限度的±20%。 范围不是线性关系考察的浓度范围，而是测定方法应能达到的准确测定的范围。范围是规定值，对于化学药品，是根据测定项目和精密度要求规定的，如制剂规定含量为标示量的90%~110%，即方法的范围考察规定应为80%~120%。对于中药分析方法，范围的确定较为困难，但可从以下几方面考虑： 1、含量限度有高、低限时，可参照化学药品； 2、中药往往只规定下限，限度值为1~10%时，考察范围建议为低限-30%，高限50%；限度值小于1%时，考察范围建议为低限-50%，高限在条件允许的情况下尽量做得更宽。 ▉耐用性：耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法用于常规检验提供依据。开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性 。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。 典型的变动因素有：被测溶液的稳定性，样品提取次数（中药的提取次数考察不属于耐用性）、时间等。 液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的组成比例或pH值，不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱，柱温，流速及检测波长等。 气相色谱法变动因素有：不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体，柱温，进样口和检测器温度等。 薄层色谱的变动因素有：不同厂牌的薄层板，点样方式及薄层展开时温度及相对湿度的变化等。 经实验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性实验，以确保方法有效。 ▉稳定性：为“中药新药质量标准研究的技术要求”中对供试品溶液和对照品溶液的要求，可纳入新版药典分析方法验证指导原则的“耐用性”中。 四、微生物限度或无菌检查的方法验证 背景：（1）今年7月1日正式执行的中国药典2005年版附录规定：建立微生物限度或无菌检查