以中国仓鼠卵巢细胞表现猪颗粒球巨噬细胞群落刺激因子重组蛋白.DOC

以中國倉鼠卵巢細胞表現豬顆粒球巨噬細胞群落刺激因子重組蛋白 Cloning and Expression of Porcine Granulocyte/Macrophage Colony- Stimulating Factors (GM-CSF) by Chinese Hamster Ovary (CHO) Cells 研究生：黃雅菁 Huang, Ya-Ching 指導教授：莊秀琪 Chaung, Hso-Chi 【摘要】 群落刺激因子 (colony-stimulating factors；CSFs) 是一群與血球細胞造血作用有關的重要細胞激素，包含巨噬細胞群落刺激因子 (macrophage- colony stimulating factors；M-CSF)、顆粒球群落刺激因子 (granulocyte- colony stimulating factors；G-CSF)、顆粒球-巨噬細胞群落刺激因子 (granulocyte/macrophage- colony stimulating factors；GM-CSF) 及多群落刺激因子 (multi- colony stimulating factors；IL-3)。豬GM-CSF是一種醣蛋白，分子量為16311 Daltons，由多種不同型態的細胞，包括T淋巴球、B淋巴球、巨噬細胞、內皮細胞，以及纖維母細胞所產生，為骨髓產生顆粒球及巨噬細胞所必需之生長因子，具有調控顆粒球和巨噬細胞成熟及分化的能力。GM-CSF已廣泛使用於在生物體外 (in vitro) 誘發骨髓中的造血細胞與週邊血液中的單核球的增生、分化為具功能性之樹狀突細胞 (Dendritic cells；DC)。本實驗以真核表現系統產生具生物活性的豬GM-CSF，以表現載體pcDNA3.1/V5-His TOPO TA vector連結豬GM-CSF，經定序確認後與GenBank AY116504所發表之序列比對完全相同，以含綠色螢光蛋白 (green fluorescence protein；GFP) 報導基因之載體評估其轉染效率，於轉染第7天時轉染效率為40%，再以含豬GM-CSF之表現載體轉染 (transfection) 至中國倉鼠卵巢細胞 (Chinese hamster ovary cells；CHO cell)，經由含G-418之F-12細胞培養液挑選其穩定表現細胞株 (stable clone)，取其細胞培養液以SDS確認其中含分子量為17.6 kDa之蛋白質，並以Western blotting確認細胞培養液內含豬GM-CSF蛋白質結構，其生物活性為53 U/mg。 關鍵字：顆粒球-巨噬細胞群落刺激因子 (granulocyte/macrophage- colony stimulating factors；GM-CSF)、樹狀突細胞 (Dendritic cells；DC)、中國倉鼠卵巢細胞 (Chinese hamster ovary cells；CHO cell) 【Abstract】 The colony-stimulating factors (CSFs) are a group of cytokines essential to the hematopoiesis of blood cells. They consist of the macrophage-CSF (M-CSF), granulocyte-CSF (G-CSF), granulocyte/macrophage-CSF (GM-CSF), and multi-CSF (IL-3). Porcine GM-CSF, a glycoprotein with a predicted molecular weight of 16311 Daltons, is produced by a number of different cell types, including T and B lymphocytes, macrophages, endothelial cells, and fibroblasts. GM-CSF is required for hematopoiesis of granulocytes and macrophages in bone marrow and regulates their maturation and differentiation. GM-CSF is the major stimulatory cytokine for in vitro differentiation and viability of bone marrow hematopoietic cel