DNA,RNA提取原理方法和琼脂糖凝胶电泳,PCR技术,限制性内切酶简介.pptVIP

实验步骤 实验器械 实验方法 试剂配制 1.5×TBE缓冲液：450 mmol/L Tris-硼酸，10 mmol/L EDTA，pH值8.0。使用时将上述储存液稀释10倍至0.5×TBE缓冲液，可同时作为电泳及制胶用的缓冲液。 制胶 1. 根椐制胶量及凝胶浓度，在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中，加入准确称量的琼脂糖粉（总液体量不宜超过锥瓶的50%）。琼脂糖粉末与0.5×TBE buffer的比例参考下表，常用琼脂糖浓度为0.7-1%。 琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围 实验方法—制胶 1.在锥瓶的瓶口上盖上保鲜膜或牛皮纸，并在膜或纸上扎些小孔，然后在微波炉中加热溶解琼脂糖。加热时，当溶液沸腾后，请戴上防热手套，小心摇动锥瓶，使琼脂糖充分均匀溶解。此操作重复数次，直至琼脂糖完全溶解。 2.使溶液冷却至50℃-60℃左右，如需要可在此时加入溴化乙锭溶液（终浓度0.5μg/ml）或按照1μL/30mL的比例加入DNAgreen染料，并充分混匀。 3.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3~5 mm之间。制胶模如下图所示，小胶倒入25-30 mL左右琼脂糖溶液，大胶则60-70 mL左右，若需切胶回收，凝胶可适当加厚。 4. 在室温下使胶凝固，大约30分钟~1小时。 实验方法—上样 1.取适量样品与6×上样缓冲液混匀（如：1 μl样品与5