微生物学实验_第一部分_微生物学实验基本技能培训.docVIP

PAGE / NUMPAGES 第一部分 微生物学实验基本技能培训 第一次实验（4学时，2人/组） 绪 言 介绍本课程的教学大纲、实验指导书、实验要求和考核方法； 介绍本学期《微生物学实验》课程的内容安排和时间安排。 介绍微生物实验室须知事项，注意生物安全、水电防火安全等。 介绍实验预习报告与实验报告的统一格式和要求。 实验预习报告： 标题 目的要求 原理 实验器材 操作步骤（含注意事项） 预期结果 实验报告： 标题 实验器材 实验程序与操作要点 结果 讨论与体会 思考题 考核： 评分比例：平时考核占60%，期末考核占40%。 平时考核内容包括预习报告、实验操作及实验报告（各占20%， 40%， 40%。） 平时考核登记 A+：95，A：90，B+：85，B：80，C+：75，C：70，D+：65，D：60，E：≤50 实验一 培养基的配制与无菌器材的准备 一、目的要求 1、明确培养基的配制原理。 2、通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。 3、了解灭菌的常用方法及应用对象。 4、学习高压蒸汽灭菌锅的操作方法及注意事项。 5、学习干热灭菌的操作技术。 6、了解分离培养微生物前的有关准备工作。 二、基本原理 培养基是人工配制的适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，它是进行科学研究，生产微生物制品及应用等方面的基础。由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多，要根据培养目的和检测需要不同，选择配制不同的培养基。 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具。一般培养基在121．3℃灭菌20分钟即可。 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160—170℃），时间长（1—2小时）。但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧，因而一般塑料制品不能用干热灭菌。 三、实验器材 1、试剂 牛肉膏、蛋白胨，氯化钠，琼脂，1mol/L NaOH，1mol/L HCl等。 2、仪器和其他用具 试管，三角瓶，烧杯，量筒，培养皿，玻棒，涂布棒，培养基分装器，天平，药勺，高压蒸汽灭菌锅，pH计，pH试纸等。 四、实验操作步骤 （一）、培养基的配制 称量 -熔化- 调pH -过滤-分装 - 加塞 - 包扎标记 - 灭菌 - 搁置斜面或倒平板 - 无菌检查 配方：牛肉膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，氯化钠5.0g，水1000ml，pH7.4-7.6。 固体培养基一般加琼脂15-20g。 1、牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备（以每组300ml计） （1）称量：除琼脂外，按培养基配方比例依次准确地称取药品，放入搪瓷杯中。蛋白胨极易吸水，称量时动作要快。 （2）熔化：量取蒸馏水，加入所需水量的一部分至上述搪瓷杯中，用玻璃棒搅拌，待药品溶解后，加入琼脂，倒入余下的水，在电热板上加热熔化。加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。 （3）调pH：待培养基稍冷却后，用精密pH试纸测量培养基的原始pH，若偏酸，用1mol/L NaOH边滴加边搅拌，使之达到pH7.4-7.6。若偏碱，则用1mol/L HCl调节。 （4）过滤：趁热过滤。如无特殊要求，可省略。 （5）分装：用分装装置将培养基装入试管，高度为试管总长的1/5，每组分装6支试管。余下培养基转入三角瓶中，培养基的量为三角瓶容量的1/3-1/2。 在漏斗下口处套有一段透明胶管，胶管下部用弹簧夹夹紧。分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。 （6）加塞：试管加棉花塞（或泡沫塑料塞、试管帽），三角瓶加棉塞或泡沫塑料塞。 棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与拇指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞做成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉