生物制药工艺学课件.ppt

2．诱变育种（1）诱变处理：①化学诱变；②物理诱变（2）代谢调节选育（3）基因重组技术改变代谢途径（4）原生质体融合突变株筛选一般进程如图所示第三第四轮同第二轮 * PPT课件 3．菌种保存 （1）保存目的：防止退化 （2）菌种退化检查方法 （3）菌种退化防止方法 （4）菌种保芷方法：①斜面低温保存 4℃，湿度70%，细菌可保存1月，放线菌2月，酵母4～6月；②液体石蜡封芷法 121℃×30mm灭菌，干燥，封管；③甘油冷冻法；④冷冻干燥法；⑤液氮保藏法 * PPT课件 二、发酵工程技术基础发酵工程：单细胞纯培养工业化过程，以产生大量目的物。1．液体培养——深层发酵2．固体培养——浅盘培养发酵设备：空压机、种子罐、发酵罐，蒸汽发生器、空气过滤器、离心机及多种参数控制与检测设备，以L-Lys生产设备为例，见图1所示。 ? * PPT课件 图1 L-Lys生产过程工艺设备图 * PPT课件 第二节 生物药物提取、分布、纯化技术基础 一、生物材料的选择： 1．生物活性物质存在部位：胞内、胞外、胞浆、质膜、器膜、周质 2．生物材料的采集与质控 （1）品种鉴定；（2）防止污染与感染； （3）选择富集目的物材料； （4）冷冻保存 * PPT课件 二、生物活性物质的提取，浓缩与干燥1．提取方法与优化（1）溶剂选择（2）添加剂 ①保护剂；②酶抑制剂（3）提取条件 ①温度；②pH；③盐；④表面活性剂 HLB值可供选择表面活性剂 （一般10～20为佳） 优化：通过多因子、正交实验设计工艺条件 * PPT课件 2．浓缩与干燥 （1）浓缩方法：①盐析；②有机溶剂沉淀；③超滤；④真空浓缩或薄膜浓缩；  ⑤离心冻干 * PPT课件 （2）干燥：①低温真空干燥；②喷雾干燥；③冷冻干燥 * PPT课件 * PPT课件 三、分离纯化方法：含量低、易变性、步骤多、多维组合，逐级分离 （1）粗品分离：盐析，分级沉淀，萃取，超滤 （2）分离纯化：多种色谱层析法 （3）精制：亲和层析，HPLC，FPLC，电泳或等电聚焦 四、分离纯化原理： 1．根据分子极性与溶解度大小 2．根据分子形状与分子大小 3．根据电荷差异 4．根据吸附特性 5．根据生物配基特性 * PPT课件 第三节 生物技术药物制造技术基础Basisof biotech drug pharmaceutical technolog 一、基因工程制药技术基础 （一）重组DNA技术基本原理 基因工程是通过体外重组将甲生物基因转入乙受体生物内进行表达的生物技术，包括6个主要过程： （1）获得目的基因；（2）构建DNA重组体； （3）将重组体导入宿主细胞； （4）目的基因的克隆与鉴定； （5）目的基因的扩增与目的蛋白的表达。 （6）目的蛋白的纯化与制剂 * PPT课件 ?2．基因工程药物制造过程 * PPT课件 转化 获得目的基因→构建重组体 → 构建工程菌（或细胞）→克隆与鉴定 Up stream →扩大工程菌培养（或细胞）→纯化目的蛋白→除菌过滤→半成品检定 →制剂→成品检定→包装  Down stream * PPT课件 二、基因工程制药主要操作技术 （二）基因工程制药操作技术 1．目的基因的获得 （1）逆转录法：真核基因转录的hmRNA在原核不能直接表达（隐含有内函子），在原核中缺乏hmRNA后加工系统，故不能成为成熟的hmRNA,故要先纯化目的mRNA，再通过逆转录作用下合成SSDNA(Sigle stran DNA)。 ①cDNA第一链的合成:以目的mRNA为模板（3’-poly…AAA）,以oliger-dT为引物，加入dNTP, 在逆转录酶作用下合成SSDNA(Sigle stran DNA). ②cDNA第二链的合成:先用碱或RNaseH水解除去与SSDNA配对的mRNA得到cDNA第一链，作为合成cDNA第二链的模板，在DNA聚合Ⅰ（klenow片断）作用下，加入dNTP,从5’→3’合成带有发夹结构的U型DNA，以核酸酶S1切除U型结构，形成双链DNA dsDNA(cDNA)。 * PPT课件 图5 目的基因的获得 * PPT课件 （2）通过PCR技术制备目的基因 PCR（polymerose chain reaction）典型反应