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关于冰冻红细胞在制备过程中减少细胞损害的探讨 ?78?中华翻I合II岔床医学杂志●经验交流●2005年8月第七卷第8j明 2.杨锡强.易着文.儿科学.第六版.人民卫生出版社,2004:126,3.诸福棠,等.实用儿科学.第四版.人民卫生出版社,1985:485 141,459, 关于冰冻红细胞在制备过程中减少细胞损害的探讨 【关键词】冰冻红细胞离心力甘油 王惟李佳李丹 长春市中心血站吉林长春130033 冰冻红细胞保存期达10年.为需要稀有血型[Rh(D)阴 性1病人提供方便.为了更好地提高冰冻红细胞血液的质量, 笔者在红细胞冰冻保存以及解冻洗涤过程中,对减少红血球 损害.以及降低离心力,降低上清游离血红细胞蛋白含量等 问题进行了实验观察.现报告如下. 1,材料与方法 1.1试剂与耗材 57%甘油,9%氯化钠溶液,三珠冷冻袋,无菌四联袋(北 京博德桑特输采血器材科技开发中心),羟乙基淀粉溶液(济 南三九益民制药有限公司),0.9%生理盐水. 1.2制备方法 经过冰冻采用高浓度甘油(57.1%)慢速冷冻一80~C保存. 将Rh(D)阴性全血或红细胞悬液离心去上清.将红细胞转移 至三珠袋加甘油,甘油化的红细胞中甘油浓度40%.用浓度 梯度法洗涤:分别用9%NaC1溶液与羟乙基淀粉溶液洗涤.再 用0.9%NaC1溶液与羟乙基淀粉溶液洗涤.最后用0.9%NaC1 溶液反复洗涤.制备悬浮红细胞供临床使用. 1.3质量检测 对于不同离心力制备冰冻红细胞,采用血细胞计数仪检 测法.检定红细胞回收率,上清游离血红蛋白含量采用联本胺 法.体外溶血采用联本胺法,高碘双钠法检测甘油残余量. 1.4统计学处理 在制备冰冻红细胞过程中,适当降低离心力,既能很好 地去除甘油.又能减少因重离心对红细胞的破坏.笔者采用 对照方式进行数字式对比. 1.5标准 上清血红蛋白不超过1g,I;残余甘油含量在10g,I;红细 胞回收率8%;体外溶血实验≤50%. 2.讨论 红细胞活性的基础.目前,冰冻红细胞所使用的防冻剂为渗 透性保护液甘油.由于甘油渗透压较高.在加入甘油时一定 要先控制速度,先20滴,分,3分钟后40滴,分,5分钟后60— 70滴,分,25分钟左右加完即可.由慢到快,逐渐提高滴速,并 使血液制剂的血袋始终保持震荡状态,血袋内有玻璃珠,起 搅拌作用,让甘油缓慢均匀的和红细胞混合.甘油加完毕后 一 定要静止30分钟.另外.加甘油前和加完甘油后都要排尽 血袋内空气,如果血袋内气泡太多,在形成大的气泡的过程 中,小气泡需不断破裂,这样对红血球是一个损害.另外,血 袋内有空气,在冰冻的过程中也易损坏血袋.在解冻去甘油 过程中应做到以下几个方面 2,1将冰冻的红细胞制备成解冻甘油红细胞关键的第一 步是在一80℃冰箱取出红细胞后要迅速浸入37—40℃水浴箱 中,水浴箱的水一定要浸没血袋,不断摇动,使血袋与水充分 接触,加速其融化,但不能用力去挤压血袋,减少红细胞在溶 化过程中的机械损伤.溶化好的血袋要在室温静止10分钟. 让血红细胞得到充分休息,增强血球的抗破坏能力. 2.2甘油化的红细胞的内环境是高渗的.为防止红细胞 遭到人为破坏,一般采用梯度洗涤法,先用高渗盐水9%NaC1 使甘油从红细胞内逐渐释放出来,逐渐降低渗液的浓度.这 一 步洗涤过程重点是高渗盐水的速度一定要缓慢些.30滴, 分逐渐提高滴速.7分钟加完即可,而且每次加完洗液后一定 要平衡5—10分钟后再离心. 2.3注意适当的下降离心力(见表1),对冰冻红细胞达 到各种质量标准起到绝对性作用. 红细胞甘油化前,保养液为ACD的血液制剂2天冰冻, 保养液为CPDA一1的血液制剂在6天内冰冻.这是保持冰冻79 表1 作者简介:王惟,女,主管护师. 参考文献 1.王培华主编.文献血技术学.第二版.北京人民卫生出版社.73—