广州管圆线虫感染宿主“酸脑”形成及调控机制的研究-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

温州医学院硕士学位论文广州管圆线虫感染宿主“酸脑”形成及调控机制的研究 温州医学院硕士学位论文 广州管圆线虫感染宿主“酸脑”形成及调控机制的研究 中文摘要 目的 1．建立感染广州管圆线虫的ICOSL√一小鼠(CD275敲基因鼠)和C57BL／6小鼠模 型，观察其脾脏CD4+T淋巴细胞上协同刺激因子表达的动态变化，结合不同感染 时期脑组织的病理分析结果，探索与疾病发生发展可能相关的免疫学机制。 2．收集不同感染时期小鼠的脾淋巴细胞，并诱导其细胞因子的表达，观察小鼠 血清中IgG、IgGl、IgG2a的动态变化，分析ICOS及其配体对Thl／Th2极化的影 响，探索广州管圆线虫病的分子机制及宿主的相关调控作用。 方法 1．构建广州管圆线虫III期幼虫感染的ICOSL√一小鼠CD275敲基因鼠和C57BL／6 小鼠模型。 2．分离不同感染时期小鼠脾CD4+T淋巴细胞 2．1观察不同病期细胞表面协同刺激信号。流式细胞仪测定细胞的荧光，表达的 阳性比例用EXP30ADC软件进行分析，其结果用SPSSl7．0采用广义线性模型的单 变量分析其统计学意义。 2．2同时体外培养脾CD4+T淋巴细胞。分别加入广州管圆线虫V期幼虫可溶性 抗原和Con A活化细胞后，干预共刺激信号。培养72小时后，收集细胞上清。 ELISA法测定上清中IFN一口、IL—12、IL一4、IL一5和IL一13等细胞因子表达水平。 3．感染小鼠眼眶取血，收集血清。ELISA法测定血清中IgG、IgGl和IgG2a的 水平。 4．ELISA法测定的细胞上清中细胞因子表达水平和血清中抗体水平的结果用 SPSSl7．0采用广义线性模型的单变量分析其统计学意义。 5．取不同感染时期小鼠脑组织，冰冻切片后进行HE染色和DAB染色。观察两种 小鼠脑组织的细胞形态学变化和协同刺激分子表达水平。Image J软件分析免疫 组化结果。 结果 1．感染后ICOSL√一组的淋巴细胞上协同刺激分子产生明显滞后，感染后3周才出 现显著性差异；而C57BL／6组针对AC急性感染，感染后3天即出现显著性差异。 表明广州管圆线虫感染不同时期小鼠脾CD4+T细胞参与的免疫应答与ICOS存在 密切关系，ICOS也是Th2极化重要的共刺激分子。 温州医学院硕士学位论文2．C57BL／6组感染早期出现IFN-D、IL-12增高现象，血清抗体亚型水平随着感 温州医学院硕士学位论文 2．C57BL／6组感染早期出现IFN-D、IL-12增高现象，血清抗体亚型水平随着感 染逐渐增高，预示感染两周内Thl免疫应答水平占优势，随之逐渐被Th2免疫应答 水平取代；而ICOSL缺乏组Thl型细胞因子IFN一口、IL—12的升高均相对滞后，在 感染早期Th2型细胞因子IL-4、IL一5、IL一13的表达量相对增高。 3．结合血清学抗体检测结果观察，ICOSL缺乏组与C57BL／6组相比，前者参与 体液免疫的能力较差，较低的IgGl和IgG2a水平显示ICOSL缺乏组在保护性免 疫的产生过程的信号传导通路受阻，无法快速组织有效的Th2优势应答。 4．脑组织切片经HE染色后光镜下进行初步组织形态学观察：正常对照鼠切片中 细胞形态一致，细胞核完整染成均一蓝色；感染小鼠切片中细胞胞体变小、变圆， 细胞核固缩、深染。 5．ICOSL√一组脑组织切片经DAB染色发现协同刺激分子表达出现明显滞后现象， 感染后3周才出现显著性差异；而C57BL／6组针对AC急性感染，感染后2周即 出现显著性差异。表明ICOS的缺陷可延后免疫病理反应的发生。 结论 本项研究获得了广州管圆线虫感染小鼠致病过程中CD4+T淋巴细胞协同刺激分 子动态表达特征，推测其与“酸脑发生发展的可能关系；发现干预ICOS介导 的协同刺激信号可调控Thl／Th2的极化，为探索以协同刺激分子为靶点的调控机 制及寻找控制“酸脑的发生发展的策略提供实验依据。 关键词：广州管圆线虫；协同刺激因子；细胞因子；免疫组化；流式细胞术 温州医学院硕士学位论文Study 温州医学院硕士学位论文 Study on the Formation of Eosinophilic Meningitis and the Regplation Mechanism in the Host of Angiostrongylus cantonensis ABSTRACT objective 1．Establish the model of ICOSL√-mice(CD275 knockout mice)and C57BL／6mice infection with Angiostrongylus cantonensis，observe the dynamic change of the CO-stimI-tl