国产雷帕霉素对人淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖影响的机制分析-内科学专业论文.docxVIP

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河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则, 承担相应的法律责任。 研究牛签名:互婶 导师签名:b卜I孳院领导签名: 。多年弓 月=》9日 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究生签名:五彩 导师签名:、、、、7 多孑年 弓月扣日 中文摘要国产雷帕霉素对人淋巴瘤细胞株Raji 中文摘要 国产雷帕霉素对人淋巴瘤细胞株Raji 细胞增殖影响的机制研究 摘 要 目的:探讨国产雷帕霉素(宜欣可)对人淋巴瘤细胞株 Raji细胞的体外抗增殖作用及对细胞周期的影响,并探讨其 分子机制。 方法:常规体外培养人淋巴瘤细胞株Raji细胞,采用四 甲基偶氮唑蓝(tetrzolium.based colorimetric assay,MTT)法 检测国产雷帕霉素不同浓度组(O、1、5、lO、20、40、50、 100nmol/m1)、不同时间组(24、48、72h)细胞存活和生长 的情况,从而选择适当的药物浓度及作用时间点进行进一步 的检测。根据上述MTT结果,筛选不同浓度的实验组(5、 lO、20、40、50、lOOnmol/m1)分别与阳性对照组比较; 筛选不同时间(24、48h)的实验组与12小时实验组(MTT 试验抑制增殖不明显)及各自相应的阳性对照组比较,并用 流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测定各组国产雷帕霉素 对Raji细胞周期分布和凋亡的影响,然后提取经国产雷帕霉 素50nmol/ml作用不同时间(O、12、24、48、72h)的细胞 总蛋白,考马斯亮蓝标准曲线法(Bradford法)定量,以13-actin 作为内参照,应用western blot方法检测不同组别周期蛋白 cyclinD 1、cyclinE、cyclinA、p27及凋亡蛋白抑制因子survivin 蛋白的表达水平。 结果: 1 MTT结果:国产雷帕霉素对Raji细胞具有抑制增殖的 中文摘要作用。不同浓度国产雷帕霉素(1、5、10、20、40、50、 中文摘要 作用。不同浓度国产雷帕霉素(1、5、10、20、40、50、 100nmol/m1)处理细胞24、48、72小时后,与对照组相比各 处理组吸光度值(oD)均有不同程度的下降,经SPSS统计 软件处理数据后显示,国产雷帕霉素处理24小时后药物浓度 为lnmol/ml和5nmol/ml的处理组与相应对照组比较无统计 学意义;药物处理48小时和72小时后浓度为lnmol/ml的处 理组与相应的对照组比较也无统计学意义,其余各不同浓度、 不同时间点的药物处理组与相应的对照组之间具有显著性差 异(PO.05)。且随着国产雷帕霉素处理浓度的增大、作用时 间的延长、OD值逐渐下降,即国产雷帕霉素对Raji细胞的 增殖抑制作用有明显的剂量.效应和时间.效应依赖关系。 2细胞周期和细胞凋亡检测:流式细胞仪检测国产雷帕 霉素处理后的Raji细胞周期分布和凋亡情况显示,不同浓度 不同时间点国产雷帕霉素处理后的Raji细胞均未见到明显的 亚二倍体凋亡峰。但随着药物浓度的加大、药物作用时间的 延长,处于G0/Gl期的细胞逐渐增多,而处于S期和Gz/M期 的细胞则逐渐减少。即国产雷帕霉素处理后的Raji细胞没有 明显的凋亡,而细胞周期进程阻滞于G0/G1期,且该作用呈 明显的剂量.效应和时间.效应依赖关系。 3 Western blot检测结果:国产雷帕霉素50nmol/L处理 后cyclinDl、cyclinE、p27的表达没有明显变化。在国产雷 帕霉素处理后不能检测到cyclinA和survivin蛋白的表达。 结论: l国产雷帕霉素(宜欣可)通过阻滞Raji细胞周期于G0/Gl 期而抑制Raji细胞的生长、增殖,其机制与下调cyclinA和 survivin的表达有关。 中文摘要2宜欣可对淋巴瘤可能具有治疗价值。 中文摘要 2宜欣可对淋巴瘤可能具有治疗价值。 关键词:国产雷帕霉素;淋巴瘤;Raji细胞;增殖;western blot;细胞周期蛋白;survivin 英文摘要Growth 英文摘要 Growth suppression of human Burkitt lymphoma cells

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