食品微生物之检验方法－生菌数之检验.doc

食品微生物之檢驗方法－生菌數之檢驗 101年11月19日署授食字第1011902832號公告 1. 適用範圍：本方法適用於食品中生菌數之檢驗。 2. 檢驗方法：檢體經系列稀釋後，以平板計數培養基培養及計數之方法。 2.1. 工作環境：工作平台須寬敞、潔淨、光線良好，操作平台光度為100呎燭光以上，密閉室內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。每15分鐘落菌數不得超過 15 C FU／培養皿。 2.2. 器具及材料 2.2.1. 乾熱滅菌器。 2.2.2. 高壓滅菌釜。 2.2.3. 冰箱：能維持5 ± 3℃ 者。 2.2.4. 培養箱：能維持內部溫度溫差 ± 1.0℃ 以內者。 2.2.5. 水浴：能維持水溫溫差 ± 1.0℃ 以內者。 2.2.6. 攪拌均質器（Blender）或鐵胃（Stomacher）：能適用於無菌操作者。 2.2.7. 天平：可稱量到 2000 g ，靈敏度為 0.1 g ；可稱量到 120 g ，靈敏度為5 mg。 2.2.8. 旋渦混合器（Vortex mixer）。 2.2.9. 酸鹼度測定儀（pH meter）。 2.2.10. 菌落計數器：適用於菌落之計算者。 2.2.11. 吸管輔助器（Pipette aid）。 2.2.12. 吸管（Pipette）：已滅菌。 1 m L吸管應有 0.01 m L之刻度； 5 m L及 10 m L吸管應有 0.1 m L刻度。 2.2.13. 培養皿：已滅菌，內徑約 90 mm ，深度約 15 mm ，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮痕或其他缺點。 2.2.14. 稀釋用容器：無菌袋或有1000 mL、500 mL、 99 m L及 90 m L標記附蓋（栓）之可滅菌廣口瓶。 2.2.15. 藥勺、剪刀、小刀、壓舌板及鑷子：可滅菌或可拋棄式者。 2.2.16. pH試紙：範圍6-8。 2.2.17. 試藥：氯化鈉、磷酸二氫鉀（KH2PO4）、氫氧化鈉、葡萄糖（glucose）及油酸聚醇山梨酯（polysorbate 80, Tween 80）均採用試藥級；蛋白腖（peptone）、胰化蛋白腖（tryptone）、酵母抽出物（yeast extract）及洋菜（agar）均採用微生物級。 2.2.18. 1N氫氧化鈉溶液之配製： 　　? 稱取氫氧化鈉 4 g ，加入無菌水溶解使成100 mL。 2.2.19. 稀釋液之配製： 2.2.19.1. 生理食鹽水： 　　取氯化鈉8.5 g，溶於蒸餾水 1000 m L中，分裝於稀釋用容器中，經 121℃ 滅菌15分鐘。 2.2.19.2. 磷酸鹽緩衝液（Butterfields phosphate-buffered dilution water）： 　　??? 取磷酸二氫鉀 34 g ，溶於蒸餾水500 mL，以1N氫氧化鈉溶液調整pH值為7.2，再加蒸餾水使成1000 mL，以 121℃ 滅菌15分鐘，貯存於冰箱中，作為原液。使用時，取原液1.25 mL，加入蒸餾水使成1000 mL，分裝於稀釋用容器中，以 121℃ 滅菌15分鐘。 2.2.19.3. 0.1%蛋白腖稀釋液（0.1% peptone diluent）： 　　取蛋白腖 1 g ，溶於蒸餾水使成1000 mL，分裝於稀釋用容器中，經 121℃ 滅菌15分鐘，最終pH值為7.0 ± 0.1。 2.2.20. 平板計數培養基（Plate count agar, PCA），亦稱標準方法培養基（Standard method agar） ?????????????胰化蛋白腖（tryptone） 5 g ?????????????酵母抽出物（yeast extract） 2.5 g ?????????????葡萄糖（glucose） 1 g ?????????????洋菜（agar） 15 g ????????????蒸餾水 1000 mL 　　加熱溶解後，分裝於適當之容器中，經 121℃ 滅菌15分鐘，最後pH值為7.0 ± 0.2。 2.3. 檢液之調製 2.3.1. 固態檢體：將檢體切碎混合均勻後，取 50 g ，加入稀釋液450 mL，混合均勻，作為10倍稀釋檢液。 2.3.2. 粉狀、粒狀或其他易於粉碎之檢體：以已滅菌之藥勺或其他用具將檢體粉碎後，混合均勻，取 50 g ，以下步驟同 2.3.1 .節之操作。 2.3.3. 液態檢體：將檢體振搖均勻混合，取 50 m L，作為原液，以下步驟同 2.3.1 .節之操作。 2.3.4. 冷凍檢體：須解凍者，如冷凍魚、禽畜肉、蔬果、水餃等，應在冷藏之溫度下解凍（如2～ 5℃ ，18小時內即可解凍完全）；亦可使用