王婷婷--miR-95通过靶标SNX1促进结肠癌细胞增殖修改.pptVIP

MicroRNA-95 Promotes Cell Proliferation and Targets Sorting Nexin 1 in Human Colorectal Carcinoma W.T.T 2014-3-30 microRNA是一类约22个核苷酸长度的非编码RNA小分子，一般通过与mRNA的3‘UTR区域相互作用从而抑制相关基因的表达。据研究表明，microRNAs在转录后水平上至少调控了三分之一的人类基因。目前最新的microRNA数据库（miRBase）版本号是17.0（April 2011，），涵盖了153个物种、共19724条成熟microRNA序列。虽然microRNA的研究进展神速，但是大多数microRNAs在生理或病理过程中发挥作用的机制仍未被揭示出来。 结肠癌（colorectal carcinoma，CRC）是世界第三大癌症，虽然在过去几十年中结肠癌的治疗技术取得了长足的进步，但是结肠癌的分子病理机制仍未被了解清楚。过去的研究发现了一些蛋白编码基因（例如：P53，APC，K-ras，DCC等）可能与结肠癌的形成有关，但是在结肠癌形成过程中发挥作用的被发现的microRNA却少之又少。 复旦大学附属肿瘤医院和上海市肿瘤研究所癌基因和相关基因国家重点实验室利用基因芯片高通量筛选的方法，找到了影响结肠癌增殖速度的microRNA——miR-95，并鉴定了miR-95的下游靶基因SNX1。 一、基因芯片高通量筛选发现miR-X与肿瘤细胞增殖有关 研究小组首先选取n对肿瘤组织和癌旁组织 microRNA芯片（Agilent microRNA microarray）进行分析，共发现有表达差异的microRNA。 从中选取了几个microRNA用miRNA拟似物转染分析实验（miRNA mimics transfection assay）分析它们对肿瘤细胞生长的影响， 通过一系列体内、体外实验证实miR-X确实能促进（抑制）肿瘤细胞的增殖。 获得对肿瘤影响最强的miR-X microRNA一般通过抑制下游基因来发挥作用，由于前面的研究结果表明miR-X促进（抑制）肿瘤细胞的增殖，那么它所抑制的下游基因应该是肿瘤抑制（激活）基因。 二、 miR-X通过作用于靶基因Y促进(抑制）肿瘤细胞增殖 用TargetScan预测一些miR-X的靶基因 采用荧光素酶报告基因分析筛选靶基因 分析靶基因功能及证实是否是最佳靶标基因 进一步阐明miR-X在肿瘤中的功能和分子机制 Introduction In this study, we investigated the miRNA expression profiles in RC and identified a new proliferation-promoting miRNA,miR-95, which is frequ-ently up-regulated in CRC. Moreover,we identified sorting nexin 1 (SNX1), a putative tumor suppressor in CRC (14), as the direct functional target of miR-95. Materials and methods Human tissues and cell lines Microarray analysis Vector constructs Lentivirus production and transduction RNA extraction and quantitative real-time PCR Oligonucleotide transfection Cell proliferation assay and colony formation assay Materials and methods Luciferase assay Tumor formation assay in a nude mouse model Immunohistochemical staining Western blot Statistical analysis Results Expression of miR-95 is frequently increased in human CRC tissues Unsupervised hierarchical clus