课件：第二章医用放射性同位素.ppt

常用的有葡聚糖凝胶（Sephadex）、聚丙烯酰胺凝胶（Bio-Gel P）、琼脂糖（Sepharos和Bio-Glas）、二乙烯苯凝胶等，都是有机凝胶。 其中，葡聚糖凝胶是生物化学领域中应用最广泛的凝胶，它是先用细菌发酵将蔗糖合成相对分子质量为4×104~20×104的葡聚糖，然后用环氧丙烷交联成型。选择适宜的条件，可控制交联度和网孔的大小。 葡聚糖凝胶常用水泡涨，也可用乙二醇、二甲亚砜、甲酰胺泡涨，一般浸泡时间为6~24h，用倾泻法漂去细微颗粒即可装柱使用。 它们常用于标记蛋白质、酶、肽、核酸、激素、多糖等的分离和纯化。 凝胶渗透柱色谱法的优点: 是不依赖流动相和固定相的相互作用，因此操作简单，无需梯度淋洗装置； 试样在色谱柱中的保留时间比其它色谱法短得多，因而淋洗峰相对较窄，有利于检测； 无需依赖固定相，因此分离容量比其它色谱法大得多，且回收率高，副反应少，凝胶使用寿命长等。 缺点: 是淋洗峰的容量小，不能分离分子大小相近的物质等 凝胶渗透柱法的基本操作和吸附柱色谱和离子交换柱色谱大致相同，不再赘述。 高效液相色谱法(high performance liquid chromatography) 将极细的离子交换树脂装入不锈钢柱子中，用高压泵将淋洗剂以很高的压力（如100~500kg/cm2）压入柱顶，使之以高流速（10~25ml/cm2?min）流过色谱柱，以达到快速、高效的分离目的，即称高效相色谱（简称HLPC），也称高压液相色谱。此法高效的关键在于固定相的粒度。 离子交换色谱常用的树脂粒度为100~200μm，甚至更大；而高效离子交换色谱所用的树脂粒度只有5~10μm，甚至更小。 由于树脂颗粒很细，大大增加了树脂的比表面，加快离子交换动力学过程，且使溶液流动更均匀。 尽管对流体的阻力很大，但加高压后仍可获得很高的流速，这就大大缩短了分离时间，提高了工作效率，还减少了气泡的产生 由于操作压力高，因此对设备的要求也高。它需要特制的耐高压的色谱柱、泵、阀门和液槽等设备，并装有在线分析系统，以适应流速快、控制要求严的特点。 目前，许多生化物质的分离都用高压液相色谱，而且根据不同分离对象可更换适宜的色谱柱，灵活、方便，分离效果好，速度快，因而应用广。 HPLC配备不同的检测器时，还可用于分析。在放射性药物的研制中,HPLC连接放射性探测器，可用来进行复杂体系标记物的放射化学纯度测定。 2、纸色谱法（paper chromatography） 纸色谱法是用色谱纸或以萃取剂、液体离子交换吸附在色谱纸上作固定相，用有机溶剂或水溶液作流动相来分离不同物质的一种色谱分离法。 将样品用微量加液滴到一条色谱纸的一端（即原点），晾干后将此端浸于适宜的溶剂（称展开剂）即流动相中。在色谱纸纤维的毛细作用下，溶剂被吸上来， 样品中的不同组分以不同的速度向另一端移动，此过程称为展开，展开的距离取决于它们在溶剂中溶解度的大小和被色谱纸滞留的程度，从而形成彼此分离的谱带，达到分离目的。各组分在色谱纸上的移动情况可有比移值Rf来表示： Rf= 某组分移动的距离 展开剂前沿移动的距离 图2-5 纸色谱装置示意图 图2-6 纸色谱法示意图 如图2-6所示，A，B两组分的Rf值分别为a/c和b/c，两者Rf值相差越大，表示A与B越易分离。 影响Rf值的因素很多，除了组分本身的性质外，还与色谱纸的性质，含水量、展开剂的性质和展开方式、温度和湿度等因素有关。对于给定的色谱分离系统，某组分的Rf是一个特征值。 色谱图的测量通常是将展开后色谱纸取出，在展开剂前沿作好标记，经晾干或烘干后，对放射性组分可用放射性计数法或自显影法测量，即将色谱纸由原点开始，按一定间距或对应于某一Rf值的位置剪下，测其放射性活度，作出分离曲线（见图2-7），并与标准样品相对照，即可将经过处理后色谱纸直接放入仪器中进行测量，即可获得完整的分离曲线，用此进行定性的定量分析。 图2-7 纸色谱法的分离曲线 3、薄层色谱（thin layer chromatography，简称TLC） 薄层色谱法与纸色谱法很类似，它是将固定相均匀地涂覆在一块玻璃板或塑料板上，形成薄层，然后将样品滴在薄层的一端（即原点），用适宜的展开剂作流动相，借助毛细作用流经薄层，使不同组分随流动相展开，从而达到分离目的。 薄层色谱法的固定相是5~50μm细颗粒的粉末（如吸附剂、离子交换剂、萃取剂、分子筛等）与惰性支持剂（如石膏、氧化铝、聚乙烯醇等）和粘合剂（如碳酸钙、淀粉、水玻璃等）按一定比例调制成浆状物，均匀地铺在薄板上，晾干制成，厚度一般为0.2~0.5mm。 影响层薄色谱Rf的因素主要有分离物质、薄层及展开方式，温度和湿度等。样品经展开后，可喷雾适当试剂，在薄层上生成有色斑点，有针对性