乌江网箱养殖中患病花鲈的细菌分离与分子鉴定-水生态学杂志.PDFVIP

第３卷第 １期 水 生 态 学 杂志 　Ｖｏｌ．３，Ｎｏ．１ ２０１０年　１月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｙｄｒｏｅｃｏｌｏｇｙ 　Ｊａｎ．，２０１０ 乌江网箱养殖中患病花鲈的细菌分离与分子鉴定 王庆容，宋培勇，杨秀荣 （贵州省遵义师范学院生物系，贵州遵义　５６３００３） 摘要：利用微生物学常用的细菌分离、纯化方法从患病花鲈（Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓ）分离出９个菌株，编号分别为 、 、 、 、 、 、 、 、 。对９个菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因序列进行ＰＣＲ扩增，均得到约６００ｂｐ的片段。将 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅶ Ⅷ Ⅸ 扩增结果进行测序，结果输入到ＮＣＢＩ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）中，用ＢＬＡＳＴ工具对序列进行同源性比 对分析。结果表明， 为杀鲑气单胞菌，同源性９８％； 为不动菌属，同源性９７％； 为肺炎克雷伯氏杆菌，同源 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 性９８％； 为嗜水气单胞菌，同源性９９％； 为希瓦氏菌，同源性９９％； 为腐生葡萄球菌，同源性９９％； 为枯 Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅶ 草芽孢杆菌，同源性９９％； 为沙雷氏菌属，同源性９５％； 为杀鲑气单胞菌，同源性９７％。 Ⅷ Ⅸ 关键词：花鲈；细菌；分离；分子鉴定；１６ＳｒＲＮＡ 中图分类号：Ｓ９４１．４２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１６７４－３０７５（２０１０）０１－０１１２－０４ 　　 花鲈（Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓ）俗称鲈鱼、七星鲈 具有功能和进化上的同源性，在整体结构上极端保 等，在鱼类分类上属于鲈形目（Ｐｅｒｃｉｆｏｒｍｅｓ）、鎠科 守，并且１６ＳｒＲＮＡ基因分子大小适中，携带有充分 （Ｓｅｒｒａｎｉｄａｅ）、常鲈亚科（Ｏｌｉｇｏｒｉｎａｅ），在我国开展人 的生物信息可用来进行可靠的系统进化分析等特 工养殖已有多年，由于其养殖周期短、肉味鲜美、经 征，本研究采用１６ＳｒＲＮＡ基因序列测定，测序结果 济效益高等特点，是乌江网箱养殖量最大的品种之 输入到 ＮＣＢＩ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）中， 一。然而，随着现代化工业的迅猛发展和人口的不 用ＢＬＡＳＴ工具，对序列进行同源性比对分析，对从 断增加，每年都有大量的工业、农业和生活污水源源 患病花鲈分离的菌株进行鉴定，以期为今后渔业资 不断地流入乌江，不仅使养殖水体污染越来越严重， 源管理、鱼类病害防治等方面提供理论基础。 更使得养殖动物病害问题愈来愈突出；同时，随着乌 １　 材料与方法 江网箱养殖规模的不断扩大、集约化程度的不断提 高以及管理技术措施相对滞后等诸多因素的影响， １．１　材料 乌江网箱养殖病害频繁发生且日趋严重，已给花鲈 患病的花鲈标本于２００８年４月采自乌江上游 养殖造成了极大的经济损失。 主要支流偏岩河养殖场。 目前，大分子ｒＲＮＡ及其基因ｒＤＮＡ已被作为一 １．２　菌株分离 个分子指标，广泛地应用于各种细菌的遗传特征和 用无菌棉签沾取患病花鲈的体表患处、鳃部、体 分子差异的研究（屈良鹄，１９９３）。大量已知细菌的 内血液、肠内溶物、肝脏表面和肝脏内部等处，分别 ｒＲＮＡ基因数据都被测定并输入到国际基因数据库 涂布于营养琼脂培养基上，并尽快带回实验室。将 中，使之成为对细菌鉴定和分类非常有用的参照系 接种后的平板倒置