课件：检验科真菌检验流程.pptx

真菌检验操作规程按其侵犯人体组织和器官的不同，临床上将真菌分为引起皮肤和软组织感染的真菌和引起侵袭性感染的真菌两大类。皮肤和软组织感染的真菌，又称为浅部真菌（superficial fungi），主要侵犯机体皮肤、毛发和指（趾）甲，寄生和腐生于表皮、毛发和甲板的角质组织中。深部感染真菌主要侵袭深部组织和内脏以及全身。真菌感染检验全国临床检验操作规程真菌病原学检验程序临床标本直接检查分离培养动物实验检测抗原检测抗体病理组织标本沙氏培养基分子生物学检测直接镜检葡聚糖甘露聚糖KOH法25°C37°C墨汁法染色法经固定标本染色法：亚甲蓝染色法、革兰染色法、PAS、荧光染色法。HEPAS毛发指甲皮屑脓汁痰液观察菌落痰液脓汁脑脊液菌丝型酵母型镜检小培养生化反应全国临床检验操作规程（第四版） 783页图4-6-1 2015年3月第一版真菌鉴定程序合适采集、运送与处理标本以及遵守真菌实验检测与鉴定程序是保证真菌感染的实验检测结果正确的前提。所有标本均应在密封无菌容器运送和处理，运送时间越短越好；不能用厌氧转运或厌氧容器。粪便不推荐作为真菌检验的标本。标本的采集、运送和保存毛发、皮屑、指（趾）甲脓液、伤口、创伤及软组织血液、骨髓导管头结膜、角膜刮片、玻璃体、前房穿刺液前列腺液、阴道分泌物尿液下呼吸道标本（痰、支气管肺泡灌洗液、支气管保护性毛刷）上呼吸道标本无菌体液（脑脊液、心包液，腹膜液和滑膜液）组织??标本深部感染真菌检验深部感染真菌因常引起全身性感染又称为系统性感染真菌，包括致病性真菌和条件致病性真菌两类。致病性真菌主要有荚膜组织胞浆菌（Histoplasma）、球孢子菌(Coccidioides)、副球孢子菌(Paracoccidioides)和芽生菌(Blastomyces)。此类真菌在正常人体内不存在，一旦侵入机体即可致病。在临床上比较少见，一般呈地方性流行。-深部感染真菌检验条件致病性真菌主要有念珠菌属（Candida）、隐球菌(Cryptococcus)、曲霉(Aspergillus)、毛霉(Mucor)、卡氏肺孢菌(Pneumocystis carinii,PC)和马内菲青霉（Penicillium marneffei）等，此类真菌属于人体正常菌群，通常情况下不致病，只有在菌群失调、免疫力低下等一定条件下才会致病。是目前临床上深部真菌感染最常见的病原菌，且呈增长趋势。-广泛分布于自然界，如土壤、腐败有机物、粮食和饲料等，有时也存在于正常人体的皮肤和粘膜表面。（一）分类和命名其中大多数曲霉只发现了无性阶段，它们归属于半知菌亚门、丝孢菌纲、丝孢菌目、丛梗孢科，少数种具有性阶段归入子囊菌亚门、不整子囊菌纲、散囊菌目、散囊菌科。其中对人致病的曲霉主要有烟曲霉(A.fumigatus)、黄曲霉(A.flavus)、黑曲霉(A.niger)、土曲霉（A.terreus）和构巢曲霉(A.nidulans)，临床上以烟曲霉最为常见。深部感染真菌检验曲霉属(Aspergillus)（二）临床意义曲霉是条件致病菌，在人体免疫功能降低时继发感染引起疾病，如长期使用广谱抗生素、免疫抑制剂、肾上腺皮质激素，放疗、化疗，各种恶性肿瘤、糖尿病、AIDS等可诱发曲霉病。曲霉可侵犯机体许多部位，尤其是呼吸系统，引起肺曲霉病。曲霉可局限在肺内感染也可播散到其他器官，甚至引起全身性感染。曲霉还可诱发超敏反应引起过敏性支气管肺曲霉病。有些曲霉可产生毒素引起食物中毒，有的毒素如黄曲霉毒素、杂色曲霉素有致癌作用，特别是黄曲霉毒素与人类原发性肝癌的发生密切有关。深部感染真菌检验曲霉属(Aspergillus)（三）真菌检验1.标本采集 标本主要有痰液、脓液、分泌物、皮屑、耵聍、尿、粪便等。2.直接显微镜检查 标本用氢氧化钾涂片，镜检可见分枝有隔菌丝，有时可见分生孢子梗、顶囊及小梗。若为有性期感染，可见到闭囊壳。深部感染真菌检验曲霉属(Aspergillus)（三）真菌检验3.分离培养 标本接种沙氏培养基，温度27℃±1℃，耐高温的菌种37℃或45℃培养，培养时间7-14天，观察菌落特征，尤其是颜色的变化。4.鉴定 曲霉的鉴定主要依据菌落质地、颜色，显微镜检查所见如①分生孢子头形状；②分生孢子梗：颜色、表面粗糙或光滑；③顶囊：形态、梗占据顶囊表面积的大小；④小梗：单层还是双层；⑤分生孢子：表面是否光滑及有无纹饰；⑥有无闭囊壳。分生孢子头是曲霉属具有特征性的结构之一，由顶囊、产孢细胞和分生孢子链组成，可以是球形、放射形、圆柱形或棒形，且具有不同的颜色。深部感染真菌检验曲霉属(Aspergillus)取菌落根部进行湿片镜检，未见典型菌体形态，需继续孵烟曲霉菌落烟曲霉,光镜 X400生长迅速，菌落初黄、后为烟绿色或黑褐色，背面无色或黄褐色，绒毛状。顶囊烧瓶状；单层小梗，布满顶囊表