电泳技术课程实例.pptVIP

第九节;四、层析技术;（一）层析的分类;（二）排阻层析 （凝胶层析）;1、凝胶层析的特点及应用;2、凝胶层析的原理;;;葡聚糖凝胶(Sephadex )的物理特性;4. 层析柱的重要参数 ;⑶内水体积：因为凝胶为三维网状结构，颗粒内部仍有空间，液体可进入颗粒内部，这就分间隙的总和为内水体积，又称定相体积，常用Vi表示。 不包括固体支持物的体积（Vg）。 ⑷峰洗脱体积：是指被分离物质通过凝胶柱所需洗脱液的体积，常用Ve 表示。 当使用样品的体积很少时，（与洗脱体积比较可以忽略不计），在洗脱图中，从加样到峰顶位置所用洗脱液体积为Ve。 当样品体积与洗脱体积比较不能忽略时，洗脱体积计算可以从样品体积的一半到峰顶位置。当样品很大时，洗脱体积计算可以从应用样品开始到洗脱峰升高的弯曲点（或半高处）。 ;洗脱体积;5. 凝胶过滤在试验室中的应用;6. 分子量的测定;（三）离子交换层析;1.离子交换层析的原理;;2. 离子交换层析的应用;3)分离纯化生物大分子物质 离子交换层析是依据物质的带电性质的不同来进行分离纯化的，是分离纯化蛋白质等生物大分子的一种重要手段。 由于生物样品的复杂性，一般很难只经过一次离子交换层析就达到高纯度，往往要与其它分离方法结合使用。 使用离子交换层析分离样品要充分利用其按带电性质来分离的特性，只要选择合适的条件，通过离子交换层析可