水稻GS3蛋白及其与Gβ蛋白复合物的表达及结晶初筛.pdfVIP

南方农业学报 Journal of Southern Agriculture 2016 ，47 （9 ）：1450-1456 ISSN 2095-1191 ； CODEN NNXAAB 南 方 农 业 学 报 http ：//47 卷 ： ： DOI 10.3969/j issn.2095-1191.2016.09.1450 水稻GS3蛋白及其与Gβ蛋白复合物的 表达及结晶初筛 * 罗秋琦， 曾志雄 （华中农业大学 作物遗传改良国家重点实验室， 武汉 430070） 摘要：【目的】阐明GS3蛋白在水稻中的调控机制，为解析植物G蛋白的结构及完善G蛋白的调控网络打下基础。 【方法】分别采用表达载体 pGEX-6p-1 和pET-28b-sumo诱导表达GS3蛋白N端结构域OSR和GS3蛋白C端结构域，再 使用凝胶过滤柱Superdex 200/75 10/300 和阴例子交换层析柱Mono Q 5/50纯化表达蛋白，通过筛选优化晶体和X射 线衍射的方法对GS3及 GS3与Gβ共表达复合物的结构进行研究 。 【结果】将构建的重组蛋白OSR-pGEX-6p-1 与 GβN- pET-28b-sumo转入大肠杆菌BL21 （DE3 ）中共表达，经GST beads亲和层析可获得2条条带，分别为OSR-GST（31 kD ）和GβN-sumo （26 kD ），再过Ni2+ beads 亲和层析同样有2条条带，而 SDS凝胶电泳结果显示有4条条带，分 别为GST（26 kD ）、sumo（17 kD）、GβN （9 kD ）和OSR（5 kD ）。 经阴例子交换层析柱Mono Q 5/50分离纯化可获得GβN （9 kD ）和OSR（5 kD ）二者的复合物。 将纯化后的复合物浓缩至12 mg/mL进行晶体初筛，但未获得结晶 。【结论】GS3和 Gβ互作是通过GS3蛋白N端结构域OSR与Gβ N端结构域的结合而实现，其结果符合经典的G蛋白异源三聚体模型。 关键词： 水稻； GS3蛋白； Gβ蛋白； 原核表达； 结晶初筛 中图分类号： S511 ；Q518.2 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2016 ）09-1450-07 Expression and crystal screening of rice protein GS3 and its complex with Gβ LUO Qiu-qi ，ZENG Zhi-xiong * （ National Key Laboratory of Crop Genetic Improvement ，Huazhong Agricultural University ，Wuhan 430070 ，China） ： 【 】 ， Ａｂｓｔｒａｃｔ Objective Regulation mechanism of GS3 protein in rice was investigated in order to lay foundation for analyzing structure of plant G prot