海岛棉抗枯萎病相关基因实时荧光定量PCR分析.pdfVIP

新疆农业科学　２０１６，５３（１１）：１９８０ －１９８７ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｄｏｉ：１０．６０４８／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１ －４３３０．２０１６．１１．００３ 海岛棉抗枯萎病相关基因实时荧光 定量 ＰＣＲ分析 杜荣光，姚正培，陈全家，张 杰，杜丽丽，苏秀娟，曲延英 （新疆农业大学农学院／农业生物技术重点实验室，乌鲁木齐　８３００５２） 摘　要：【目的】以不同抗性海岛棉为材料，利用实时荧光定量ＰＣＲ技术对 １１ 个棉花抗枯萎病相关基因进行 表达量分析，为海岛棉抗枯萎病育种及抗病机理提供候选基因资源。【方法】选择海岛棉抗枯萎病材料０６ － １４６、易感材料新海１４号，及以其为父母本杂交的ＲＩＬ系高代材料１０８９３（超抗）、１０８９５（高抗）、１０８９７（感病）、 １０７９６（易感）为实验材料，进行接菌处理。分别取接菌０、４、１０、１８、２８和４０ ｈ后的幼苗下胚轴，提取ｍＲＮＡ并 反转录。根据已知陆地棉抗枯萎病相关的ＥＳＴ序列和海岛棉抗病转录组测序筛选到的抗病相关基因序列设 计引物，进行实时荧光定量 ＰＣＲ反应。根据各基因在不同材料中的表达值，分析各基因与海岛棉抗枯萎病间 的关系。【结果】ＣＦＷ３、ＣＦＷ１０、ｃｏｍｐ６２８１０、ｃｏｍｐ７１３７２ 四个基因在海岛棉抗枯萎病过程中可能起着比较重要 的作用，尤其是利用抗病材料和感病材料转录组测序后得到的与抗病性有关的ｃｏｍｐ６２８１０、ｃｏｍｐ７１３７２ 基因。 【结论】不同棉花品种对病菌侵染的灵敏程度，不同的品种的灵敏度不同，用以判断基因的作用。 关键词：海岛棉；枯萎病；抗性基因；实时荧光定量ＰＣＲ 中图分类号：Ｓ５６２　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００１ －４３３０（２０１６）１１ －１９８０－０８ 育种具有重要意义。【前人研究进展】棉花抗枯 ０　引言 萎病方面在陆地棉中已有大量研究报道。海岛棉 【研究意义】海岛棉（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｂａｒｂａｄｅｎｓｅ 中有关枯萎病抗性研究却鲜见报道［５］。【本研究 Ｌ．）纤维是世界上最优良的棉纤维，是主要的纺 切入点】研究使用实时荧光定量ＰＣＲ技术分析相 织工业原料。新疆是我国唯一的海岛棉产区 ，优 关基因在抗病性不同的材料中的表达特性。【拟 越的自然生态条件为新疆海岛棉的发展提供了得 解决的关键问题】以海岛棉抗枯萎病材料０６ － 天独厚的优势。棉花枯萎病（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｗｉｌｔ）是影 １４６、易感材料新海 １４ 及以其为父母本杂交的 响棉花经济性状最主要的病害之一，在棉花生长 ＲＩＬ 系高代材料 １０８９３（超抗）、１０８９５ （高抗）、 前期，枯萎病可造成死苗，中后期则影响蕾铃生长 １０８９７（感病）、１０７９６（易感）为实验材料，进行不 发育直至脱落，导致棉花产量严重下降，纤维品 同时间的接菌处理。利用实时荧光定量 ＰＣＲ技 质变劣。随着新疆海岛棉种植面积的逐渐扩大， 术对棉花抗枯萎病相关基因进行表达量分析，为 各棉区常年连作，棉花相关的病虫害有呈逐年加 筛选海岛棉枯萎病抗性基因提供依据，进而为海 剧的趋势，特别是落叶型枯萎病迅速蔓延，生产中 岛棉抗枯萎病分子机制提供依据。 又需丰产、优质、早熟，必须在不同生态条件下具 １　材料与方法 备逆抗性的海岛棉品种。因此，开展海岛棉抗枯 萎病相关基因筛选并验证其功效，对新疆海岛棉 １．１　材 料 收稿日期（Ｒｅｃｅｉｖｅｄ）：２０１６ －０５ －１８ 基金项目：国家自然科学基金项目（３１２