微滴式数字PCR培训及应用分享-中国科学院水生生物研究所.PDF

微滴式数字PCR培训及应用分享 Bio-Rad FAS 罗艳 2019-03-11 1 • 微滴式数字PCR技术 – ddPCR原理 – ddPCR技术特点 • QX200 ddPCR系统 – QX200 ddPCR系统 – ddPCR实验操作流程 • ddPCR相关应用及实验设计 2 • 微滴式数字PCR技术 – ddPCR原理 – ddPCR技术特点 • QX200 ddPCR系统 – QX200 ddPCR系统 – ddPCR实验操作流程 • ddPCR相关应用及实验设计 3 PCR技术的发展历史 1st 2nd 3rd Routine PCR Real-time PCR Digital PCR 定性检测 相对定量 绝对定量 4 Real-Time PCR 的基本原理 实时检测：在普通PCR反应体系中加入荧光物质 （染料或探针）， 然后实时记录PCR过程中与目标分子量相关的荧光信号强度 定量原理：利用指数期C 值与起始模板量对数值间的线性相关性， q 对DNA进行定量 C : Quantification cycle q C q Threshold 5 Droplet digital PCR技术原理 PCR反应体系配制 微滴化处理 微滴的荧光信号检测 = = = DNA = = = 荧光物质 = == = = = = = = = = = = ==== = Positive reactions Negative reactions 7 ddPCR绝对定量原理 Sample 1 Sample 2 Sample 3 Sample 4 NO Low