课件：犬小孢子菌副本.ppt

讨 论 犬小孢子菌 致病因子表达 犬小孢子菌 主要致儿童头癣 儿童头皮组织 结构蛋白差异 利用SSH 可能影响 2019 - * 讨 论 Tester和driver作为探针 低丰度基因的丢失 正反向消减DNA作为探针 避免低丰度基因的丢失 高背景，阳性率降低 去掉接头 降低背景，筛选差异基因 2019 - * 实时PCR 实时监测 高特异性 高灵敏性 讨 论 2019 - * 儿童头皮培养菌株 儿童光滑皮肤培养菌株 构建文库 富集差异基因 成人头皮培养菌株 讨 论 2019 - * - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 犬小孢子菌SSH文库中差异基因的研究 硕士研究生：张渊 指 导 教 师：杨国玲 教授 专 业 名 称：皮肤病与性病 2019 - * 前 言 犬小孢子菌主要侵犯儿童 引起白癣、脓癣和体癣 儿童头癣48% 儿童体癣36% 成人头体癣16% 2019 - * 研究背景 1.儿童皮脂腺发育不完全 2.犬小孢子菌蛋白酶的作用 犬小孢子 菌儿童头癣 发病机制 推测儿童头皮是否诱导 犬小孢子菌毒力因子 ？ 2019 - * 材 料 前期试验克隆：菌液PCR，菌液克隆 主要试剂： 1. DIG High Prime LabelingDetection Starter Kit I 2. 杂交膜 3. Real time PCR Kit 主要仪器： 1. CL1000紫外交联仪（UVP） 2. Applied Biosystems 7500 Real Time PCR System 2019 - * 儿童头皮 培养菌株 (tester) 儿童光滑皮肤 培养菌株 (driver1) 成人头皮组织 培养菌株 (driver2) 斑点杂交 实时PCR 技术路线 获得差 异基因 前期完成试验 消 减 文 库 SSH 2019 - * 方法---斑点杂交 正反向 消减文库 PCR扩增 制备探针 酶切回收 杂交膜 DIG-High Primer 探针 菌液PCR产物 2019 - * 阳性克隆测序 阳性克隆菌液送大连宝生物测序：菌种为DH10B，载体为PMD-T18 测序使用引物为：F Primer（M13-47）；R Primer（RV-M） 2019 - * 测序分析 序列预处理 去除混杂基因 同源性比对 功能分类 2019 - * 实时PCR Tester mRNA Driver1 mRNA Driver2 mRNA 2个 基因 2个 基因 18S rRNA 3个RNA池均为构建消减文库时保存的总RNA 2019 - * 探针引物序列 2019 - * 结 果—消减文库酶切前后结果 2019 - * 结 果---斑点杂交 消减文库1斑点杂交部分结果 正向 反向 2019 - * 正向 反向 消减文库2斑点杂交部分结果 结 果---斑点杂交 2019 - * 阳性克隆测序及分析 共得到106个有效序列 共得到13个ESTs 8个ESTs找到了同源基因 6个同源基因具有功能分类 2019 - * 消减文库1差异基因比对结果 2019 - * 消减文库2差异基因比对结果 2019 - * 蛋白功能分类 2019 - * 实时PCR--18s rRNA 18s rRNA基因在3个RNA池中的实时PCR表达情况 2019 - * FSH1基因在tester RNA池和driver 1 RNA池中的实时PCR表达情况 实时PCR-- FSH1 2019 - * PQ-LRP基因在tester RNA和driver 1 RNA池中的实时PCR表达情况 实时PCR-- PQ-LRP 2019 - * P-GAL4基因在tester RNA池和driver 2 RNA池中的实时PCR表达情况 实时PCR-- P-GAL4 2019 - * NADH1基因在tester RNA池和driver 2 RNA池中的实时PCR表达情况 实时PCR-- NADH1 2019 - * 4个ESTs表达的相对表达倍数关系 2019 - * - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -