昆明小鼠胚胎收集时间和培养液对囊胚内细胞团集落分离培养的影响.PDF

繁殖生理 2012年 第48卷 第7期 昆明小鼠胚胎收集时间和培养液对囊胚内 细胞团集落分离培养的影响 * 本研究旨在筛选获取优质ICM集落的实验方法。以昆明系小鼠为实验动物，采集3.5、4d和4.5d的胚 胎，分别移入DMEM培养液、DMEM+白血病抑制因子（LIF）和小鼠胎儿成纤维细胞共培养体系中进行培养，观 察比较内细胞团（ICM）从透明带中孵出的时间、孵化囊胚贴壁情况以及ICM集落形成情况。结果表明：妊娠3.5d 的胚胎61%为桑椹胚，需要经过4~5d的体外培养才能形成ICM集落；妊娠4d的扩张囊胚经过3~4d的共培养 后形成ICM集落；妊娠4.5d的孵化囊胚经过 1~2d的共培养即可形成ICM集落；ICM形成率以妊娠4.5d的胚 胎最高，显著高于妊娠4d和3.5d的胚胎（ 0.01），但妊娠4.5d冲出孵化囊胚数量显著降低（0.01）；小鼠胎儿 成纤维细胞共培养体系优于DMEM和DMEM+LIF培养液。因此，采集妊娠4d的昆明小鼠胚胎，选择小鼠胎儿 成纤维细胞共培养体系，在体外培养3~4d，能够有效分离培养出可用于胚胎干细胞研究的优质ICM。 胚龄；培养液；ICM；昆明小鼠 （ ） 胚胎干细胞（embryonicstemcells，ES细胞）是具 供依据。 有高度分化潜能的、从早期胚胎内细胞团（ICM）或 原始生殖细胞（PGCs）经体外分离培养而获得的多 [1-2] 1.1 实验动物 昆明系6~8周龄清洁级小鼠，体重 能性细胞系 。研究ES细胞不仅是为了定向诱导 分化出替代病人衰老死亡细胞的同类型细胞，实现 28~32g，由重庆中药研究所提供。 1.2 主要试剂与仪器 DMEM培养基 （Gibco公 应用ES细胞治疗疾病的目的；而且也有望应用ES 细胞重新构建出机体的组织器官用于器官移植治 司），胎牛血清（FBS，杭州四季青），白血病抑制因子 疗，这将对医学和生物工程等领域的发展产生广泛 （LIF，Chemicom公司），丝裂霉素 -C（Gibco公司）， [3-5] 碱性磷酸酶（AKP，南京建成生物制品研究所）等。 而深远的影响 。体外培养小鼠胚胎获取ICM并将 其进一步培养为ES细胞是目前获取 ES细胞的主 倒置显微镜：重光，重庆光电仪器有限公司；CO培 2 要途径。因此，如何有效培养出ICM集落是影响ES 养箱：Forma3131，USAThermoFormaCO。 2 1.3 MEF的分离培养及饲养层的制备 参考文献 细胞获取效率的关键环节。收集胚胎的时间和胚胎 培养过程中所使用的培养液均能够影响优质 ICM