小麦尿卟啉原Ⅲ合酶的分离和纯化-西北农林科技大学学报.PDF

维普资讯 0}卜一}5 第 28卷 第 l期 西北农业 大学学报 V0】．28 N0．1 2000年 2月 ActaUniv．Agric Borealioccidenta[is Feb． 2000 [文章编号]iooo2782(2000)01—001l-05 小麦尿卟啉原 Ⅲ合酶的分离和纯化 S5垃 ·lot 堇—星 ，堑董盘 Q弱 5．e (1西北农业大学基础科学系，陕西扬睦 712100) (2安徽农业大学生物技术研究中心，台月E230061) [摘 要] 以4O ～7O 饱和度硫酸铵分级沉淀、DEAESepharoseiCL-6B、Sephadex G-100、羟基磷灰石 PhenylSepharoseCL一4B和制备电泳分 离纯化了小麦的尿卟啉原 Ⅲ台酶 (UROS)。酶的亚基分子质量为 54ku，全酶分子质量为66ku+酶的等电点6．3，在pH 8．2时 比括为 257~*mol／(mg·rain)，最适反应温度4O℃．5mmol／L的琉基 乙醇和 Mg抖促进 酶括 ． 纯化的小麦 UROS在 一2O℃下 0．imol／L，pH 8．5的 Tris—HCI，内含质量分数为 50 的甘 油 ，5mmol／L的巯基 乙醇和 MgC12中贮 藏 7d酶活损失 9O 。 [关键词]星 堡!鱼匿!：塞；§韭．褊 ． 啪 i 尼前珐 [中围分类号] $512．10；Q555 ．6 [文献标识码] A 生物体 内血红素和叶绿素等四卟啉化台物合成的共 同前体尿卟啉原 I，由四分子胆 色 素原在胆色素原脱氨酶和尿 卟啉原 I台酶 (Uro·porphyrinogen Ⅱsynthase，UROS， EC．4．2．1．75．)共 同催化下合 成 ]。已从人血红细胞 ]、小球藻 和大 鼠 中纯化到 uRos，高等植物 中迄今未见 UROS的纯化报道 ，仅从小麦 和豌豆 部分纯化。由于 UROS不稳定且在生物体 内含量低 ，现有人采用转人 UROS基 因的大肠杆菌 和枯草杆 菌D3研究 UROS的性质。我国发现 1种冬小麦突变体小麦返 自系，其PBGD—UROS代谢 受阻 。为此用经典层析方法纯化了小麦的uROs，为研究小麦返 自系的uROs代谢打 下基础 。 1 材料与方法 1．1 材料与试剂 小麦品种矮变 1号幼叶+采 自西北农业大学实验 田。层析装置和材料如SephadexG— 100，DEAESepharoseCL一6B和 PhenylSepharoseCL一4B电泳试剂购 自瑞典 Phamacia 公司，羟基磷灰石购 白Merck公司，ALA 由Fluka公司生产，琉基 乙醇和胆色素原为Sig· ma公 司产 品，部分胆色素原 由 自己台成。电泳和层 析用标 准分子质 量蛋 白是上海 Promega公司产品，其余试剂为国产分析纯产品。 1．2 方 法 1．2．1 UROS的纯化 除非说明，所有操作均在 4℃下进行。取 500g小麦幼 叶，加 [收稿 日期] 1999—07—12 [基垒项 目] 国家 自然科学基垒赍助项 目 [柞者简介] 范 ~g(196a-)．男 。硬士，讲师 现在安徽农业大学生物技术研究 中心工作 维普资讯