临床医学毕业rai16蛋白合成肽多克隆抗体的制备及初步应用.docVIP

RAI16蛋白合成肽多克隆抗体的制备及初步应用 姓 名： 2014年6月25日 RAI16蛋白合成肽多克隆抗体的制备及初步应用 作者：雒喜忠，王阁，许文，李琼，陈川，张志敏，胡庆，王东 【摘要】目的：制备RAI16蛋白的合成肽多克隆抗体，并进行初步鉴定和应 用，为研究RAI16蛋白的功能及作用机制获得重要的实验工具。方法：应用Fmoc 法化学合成RAI16蛋白N端第44?55位氨基酸的多肽，经C18的RP HPLC 纯化后，通过高碘酸钠法将纯化的RAI16蛋白的多肽与KLH交联；皮下注射抗 原免疫新西兰纯种大耳白兔，加强免疫得到抗血清，应用蛋0G纯化获得多克隆 抗体。对纯化的抗体进行ELISA、免疫组化、Western blot等初步鉴定和应用。 结果：化学合成RAI16蛋白N端第44?55位氨基酸的多肽，纯化后多肽纯度为 96%，达到免疫用抗原标准。多肽与KLH交联，用于免疫动物。经纯化后的抗 体效价为1 : 125 000。该多肽抗体可特异识别人脾脏组织中相对分子质量(Mr) 约为55 000的RAH6蛋白。结论：所制备的多克隆抗体能与天然RAH6蛋白发 生特异性反应，可应用于ELISA、免疫组化、免疫沉淀和Western blot等实验, 为确定RAI16蛋白的组织分布和亚细胞定位、研究RA116蛋白的功能及作用机 制提供了重要的实验工只。 【关键词】视黄酸诱导蛋白16;