氦氖激光对缺血缺氧性脑损伤新生鼠行为学和脑神经细胞增殖的影响-神经内分泌专业论文.docxVIP

n；n微光珊缺胁缺’L竹M损协新嘻融{I为学和肌神钏m埔拍帕j西州氦氖激光对缺血缺氧性脑损伤新生鼠行为学和脑 n；n微光珊缺胁缺’L竹M损协新嘻融{I为学和肌神钏m埔拍帕j西州 氦氖激光对缺血缺氧性脑损伤新生鼠行为学和脑 神经细胞增殖的影响 研究生 张伟宏 导师 吴爱群 楚宪襄 郑州大学基础医学院人体解削教研室郑州450052 摘要 目的 缺血缺氧性脑损伤(hypoxic～ischemic brain damage。HIBD)是严重威胁 新生儿健康甚至致残的常见原因，目前临床上尚无较为理想的治疗措施。已有研 究表明哺乳动物脑在发育及成熟的不同时期和不同区域均有神经干细胞存在“一 “。神经干细胞可参与修复缺损的神经网络与功能，然而仍有临床和实验认为脑 内神经元的自我修复是不够的，但越来越多的研究表明增强脑内源性神经细胞的 自我修复和增殖能力将成为治愈缺血缺氧性脑损伤最有价值的方法。氦氖激光穴 位照射是一种非侵入性治疗，具有柔和、无痛、无菌的特点，同时兼有独特的心 理和精神康复作用，具有较好的应用前景”1。但其能否促进新生)LlIIBD后脑内神 经元形态和功能的自我修复及其作用机制，目前末见报道。为此本实验采用国际 公认的新生鼠缺血缺氧性脑损伤动物模型，规测氦氖激光同时照射督脉经穴一 百会和人椎两穴两个疗程后，各组大鼠的体重、左右脑重的比值以及学习和记忆 成绩等行为学指标的变化，应用免疫组织化学检测微管相关蛋白一2(MAP2)、 5一溴一2一脱氧脲嘧啶(BrdU)和神经上皮干细胞蛋白(Nestin)存腩缺血缺氧 新生大鼠海马结构中的表达，探讨氦氖激光穴位照射对新生大鼠HJBD的作_【{』及其 机制，为临床治愈新生JLHIBD提供新方法和新途径。 方法 91只7(j龄健康wistar大鼠，体重1 2一J 59，将动物随机分为4组：1．假 手术组(n-23，死亡2只)、II．H1BD组(n：23，死I、：2只)、II】．HIBD激光非 ，(位组L n-23，死亡1只)和1V．HIBD激光八位组t n-22，无缺失值)。1： 郊州』、学200h牛倾J。}仃论文 郊州』、学200h牛倾J。}仃论文 氩氖涨光肘缺Im缺钒性腑{州“新，l耐行为学和腑补纾细胞增碴的蟛响 颈部正中切口，不结扎左侧颈总动脉，不做低氧处理；II：颈部正中切!CI，结 扎左侧颈总动脉，低氧处理后，不实施治疗；11I：氦氖激光照射腹部非穴位区， 缺血缺氧处理、疗程设计、激光参数同Ⅳ。Ⅳ：颈部正中切口，结扎左侧颈总 动脉，低氧处理。激光照射于脑缺血缺氧处理后第2d开始，照射选择“百会”、 “大椎”两穴。激光波长632．8nm、功率4mW、光斑直径3mm、功率密度56．62mV， 能量密度33．975J／cm2， 10min／次，1次／d，同一时间进行，10d为1个疗程， 共2个疗程，两疗程间隔2d。I和II动物在缺血缺氧后48h各随机抽取3只， 制备脑片应用TTC染色判定模型是否成功。各组大鼠分别在两个疗程结束后个 体称重。第2疗程结束个体称重后，从各组大鼠随机抽取6只进行脑重的测定， 剩余大鼠用Y型迷宫对其进行学习记忆检测后分别灌注，取左侧脑，常规石蜡 包埋、切片，分别进行MAP2、BrdU和Nestin免疫组化染色，光镜下观察，细 胞计数，采用SPSSl0．0软件对数据进行统计学处理。 结果 1．体重称量：对各组大鼠进行称重(g)，IV(27．34±2．78，74．3I±2．16)体重明 显高于II(23．99±1．84，67．84±3．78)和Ill(23．59±2．58，67．55±2．85)，差异 有统计学意义(尸O．05)；IV体重稍高于I(26．85±2．64，73．15±2．41)，但差异 无统计学意义(尸O．05)。 2．左／右大脑半球湿重比值：IV的左／右大脑半球湿重比值(97．50+5．09)明显高 于II(75．33±7．50)；fNIl(72．83±7．33)，差异有统计学意义(Po．05)，但和I (100．00-t-3．74)相比差异无统计学意义(尸O．05)。 3．学习和记忆能力的测定：Y形迷宫检测大鼠学习记忆能力的结果显示(次)，IV 的学习能力(23．06±4．74)和记忆能力(17．13±2．99)明显高于II(35．92±5．88， 27．25±5．63)和IIl(33．94±4．68，26．94±3．15)，差异有统计学意义(PO．05)， 但和l(23．58±3．94，17．33±3．45)相比差异无统计学意义(PO．05)。 4．MAP2免疫组织化学染色：Ⅳ大脑皮质MAP2广泛表达，强阳性染色的树突呈条索 状分布，海马各区清晰分辨出胞体比树突染色弱，胞核届中不着色，树突连续其 阳性染色呈树枝状分布于分子层。而11$!