固定化壳聚糖酶及产酶细胞制备壳低聚糖的研究-生物化工专业论文.docxVIP

浙江大学硕卜学位论文摘要 浙江大学硕卜学位论文 摘要 论文对固定化壳聚糖酶以及固定化产酶菌株(Penicillium sp ZD--Z1)降解制 备壳低聚糖进行了研究。 采用DEAE纤维素为载体，戊二醛为交联剂，对壳聚糖酶的固定化条件、 固定化酶的性质进行了研究，确定了交联剂的最佳用量为100mgDEAE纤维素与 5ml 5％戊二醛交联，酶与载体的最佳比例为23mg酶／g DEAE纤维素，固定化 酶的最适温度和pH分别为60*C矛D 4．0，其米氏常数为18．879／L；所得固定化酶 活力可达1 5U／g、酶活回收率可达81．3％，壳聚糖酶的在经固定化后，最适温 度从50。C升高到60。C、最适pH从5．0下降到4．0、米氏常数从2 499／L升高到 18．879／L，将该固定化酶重复使用十次，酶活力损失小于15％，但是该固定化酶 稳定性一般(保存半衰期约为15天)。 采用六种载体(聚氨酯泡沫、海藻酸钙、海藻酸钙／PAM、海藻酸钙／PVA、 PVA、海藻酸钙／PVA／PAM)对Penicillium sp ZD—Z1进行固定化，确定了聚氯酯 泡沫的固定化效果最好；对聚氨酯泡沫固定化Penicillium sp ZD--ZI菌的条件、 固定化菌体的性质进行了研究，确定了Penicillium sp ZD--Z1菌体的最佳固定化 条件：载体的最佳用量为O．49载体／50ml培养基、最适pH为5．0、最适培养温度 为31℃较游离菌体有所升高(游离菌的最适温度为28℃)，1 80rpm摇床下培养 48h即可达到最佳固定化效果，菌体在经固定化后其耐高温性和耐热稳定性大大 提高；在生物反应器中连续进行18批同时产酶降解试验，发现壳聚糖酶活力和 壳聚糖降解效率能保持稳定，每批壳聚糖酶活力可达到0．1 28U／ml以上，壳聚糖 的粘均分子量可以降解到4kDa以下；将酶法降解所得的低分子量壳聚糖，在初 步的分离纯化后，经红外光谱分析，壳聚糖在酶解前后主要峰位置没有变化一～ 壳聚糖的化学结构并未发生改变。实验结果表明固定化PenicilliⅣm sp ZD--Z1菌 产酶降解壳聚糖反应易于控制，不改变壳聚糖的化学结构，是～种有效的制备高 品质壳低聚糖的方法。 关键词：壳聚糖，壳聚糖酶，固定化，Penicillium sp ZD--Z1，降解，聚氨酯泡 沫，DEAE纤维素 塑垩查兰堡兰堂垡丝苎 塑垩查兰堡兰堂垡丝苎 一 ABSTRACT Production of chitooligosaccharides with immobilized chitosanase and Penicillium sp．ZD-Z1 were studied in this thesis． Chitosanase was immobilized on DEAE cellulose witll glutaraldehyde by crossing-linking reaction．Preparation of the immobilized chitosanase was optimized， The optimal ratio of immobilization were as following：0 l g DEAE cellulose WaS treated with 5ml 5％solution of glutaraldehyde，then 23mg chitosanase was immobilized on the carrier．The optimal temperature and pH was 60。C and 4．0，and the kinetic parameter was 1 8．879／L．Under the optimal conditions．the activity of immobilized enzyme is 1．5U／g．and the recovery of enzyme activity is 8 1 3％．After immobilization，the optimal temperature and kinetic parameter increased(from 50C tO 60。C，from 2．499／L tO 1 8．879／5)，whereas The optimal pH reduced(from 5．0 to 4．0)，all of these indicated that the effect of interspace diffuse resistance for chitosanase’S kinetic property is greater than that of carrier’S e