过氧化物酶增殖物活化受体γ对胰腺癌生长的调节作用-内科学专业论文.docxVIP

复星大学硕士研究生论叟 复星大学硕士研究生论叟 过氧化物酶增殖物活诧受体Y对映蟓癌生眭的调节佟甩 过氧化物酶增殖物活化受体Y对胰腺癌生长的调节作用 摘要 研究目的：研究过氧化物酶体增殖因子活化受体Y(PPAR Y)在人胰腺癌 生长中的调节作用，初步探讨PPAR Y对胰腺癌新生血管生成、细胞周期改变以 及胰腺癌细胞增殖与凋亡过程的影响，并进一步揭示核因子-x B(NF．K B)和 活化蛋白(AP一1)在该过程中的介导作用，旨阐明PPAR y在胰腺癌化学预防 中的可能作用及其机制。 研究方法：1．免疫细胞化学、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法研究 PPAR Y在胰腺癌细胞株SWl990中的表达。2．四唑氮蓝还原法(MTT)研究 PPAR Y激动剂15d．PGJ2、RXR a激动剂9一cis．IRA及其联合作用对SWl990 细胞增殖的抑制作用。建立裸鼠SWl990胰腺癌细胞移植瘤模型，并给予罗格 列酮进行干预。用免疫组化方法研究裸鼠移植瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA) 表达。3．RT．PCR方法检测15d．PGJ2、9一cis．RA及其联合作用对胰腺癌细胞、 罗格列酮对裸鼠移植瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。免疫组 化染色标记移植瘤新生血管壁lV型胶原，计算肿瘤组织微血管密度(MVD)。 4．流式细胞术、电镜等方法研究15d．PGJ2、9．cis—IRA及其联合作用对SWl990 细胞凋亡和细胞周期的影响。原位缺口末端标记法(TUNEL)研究裸鼠移植瘤 组织中癌细胞的凋亡；并应用RT．PCR检测bcl．2凋亡相关基因家族成员bcl一2， bcl—xl。bak．bax以及凋亡抑制基因Survivin的表达。RT-PCR、免疫组化方法检 测15d．PGJ2、9．cis—IRA及其联合作用对胰腺癌细胞、罗格列酮对裸鼠移植瘤组 织中p27KiPl、D21wa”表达的影响。5．分别应用TransAMTM方法和RT．PCR检 测1 5d—PGJ2、9．cis．IRA及其联合应用对SWl 990细胞中NF-K B p65活性蛋 白和AP．1表达的影响。 研究结果：1．人胰腺癌细胞系SWl990存在PPARY和RXR nmRNA及蛋 白表达。2．15d．PGJ2、9-cis—RA及其联合应用对SWl990细胞系生长具有明显 抑制作用，且呈剂量依赖性。9．cis—RA对15d．PGJ2抑制胰腺癌细胞增殖具有协 同效应。罗格列酮能抑制裸鼠移植瘤生长，抑瘤率达80．7％。PCNA在治疗组 的阳性表达强度和表达区域均呈下降趋势。3．随着1 5d—PGJ2、9-cis-IRA及其联 合作用浓度的提高以及作用时间的延长，SWl990细胞分泌的VEGF受到抑制， 复旦大学碗士磷究生论文 复旦大学碗士磷究生论文 过氧化物酶增碴物活亿受馋Y对辕隙癌生妖娩调节佟鼹 且呈时间和剂量依赖性。罗格列酮可抑制裸鼠移植瘤中VEGF的表达，并可显 著降低移植瘤组织中MVD(P0．01)。4．透射电镜检测证明了15d-PGJ2、 9一cis—RA及其两者联合作用均可诱导SWl 990细胞发生凋亡：流式细胞术检测 提示在处理组均伴有肿瘤细胞凋亡比例的增高，及细胞周期G1期停滞，S期比 例下降。TUNEL染色显示干预组移植瘤组织中凋亡指数(A1)明显高于对照组 (P0．05)：促凋亡基因bak，bax表达上调，抗凋亡基因bcl．xl，Survivin下调， 抗凋亡基因bcl-2几乎不表达。15d—PGJ2组、9一cis-RA组、联合应用组中 p27KiPlmRNA表达明显强于对照组，而p21warlmRNA表达在组间却无明显改变。 罗格列酮仅上调移植瘤组织中p27 P1 mRNA的表达，而对p21Wa”无作用。 p27Ki升、p21wa蛋白仅表达于治疗组裸鼠移植瘤组织中。5．15d．PGJ2、9-cis—RA 及其联合作用干预组NF—K B p65活性蛋白含量均表现为先降后升的趋势，但都 未恢复至对照组的水平。随着15d-PGJ2、9-cis-RA及其联合作用浓度的提高， c-iUFI、c—fos mRNA表达水平总体呈现下降趋势。 主要结论及意义：1．PPAR y的活化在体内外均对胰腺癌的生长呈负向调节 作用。RXR a的激活可协同增强PPAR Y激动剂的抗增殖作用。2．PPAR Y活化 可通过下调促血管生成因子VEGF的表达，抑制胰腺肿瘤新生血管的生成。3． PPAR Y活化后通过上调促凋亡基因bak、bax，下调抗凋亡基因bcl—xl、Survivin 表达，从而诱导SWl990胰腺癌细胞凋亡。4．PPAR Y的活化可能通过上调 p27Kipl和p21Wafl表达、下调PCNA表达，从而诱导胰腺癌细胞周期G1期停滞 及抑制S期发展。5．NF