第9章节蛋白质工程.pptVIP

基因工程与蛋白质工程： 定点诱变 (site-directed mutagenesis) 在体外使DNA分子内部的特异部位发生突变的过程。 最常用的方法是合成一条序列有变异的寡核苷酸，使其与靶DNA分子杂交/退火，再合成完整的DNA。 产生随机突变的方法： 化学诱变，错掺诱变，盒式诱变。 高通量筛选法：从巨大数目的突变体库中筛选到具有期望功能的突变体。 筛选方法：表型观察筛选，当筛选的蛋白可以产生可见信号时，用简单的表型观察和筛选被广泛应用。 目前，蛋白质突变体库筛选一般是固态（琼脂糖和滤膜）或者液态（微量滴定孔板）条件下通过表型选择和筛选而完成的。 高通量筛选蛋白质突变体库的方法：噬菌体展示技术（phage display) 。　 基因内部剪接 在编码基因的内部插入或剪去特定的序列、结构原件或结构域。 5’或3’端的剪接 融合基因可以用于在体外产生不同基因或基因片段之间的融合，产生融合蛋白。 避免目的蛋白在表达时被降解 增加分泌性（信号肽） 提高溶解性（硫氧化还原蛋白） 重组酶的高效表达 一、细菌表达体系 二、酵母系统中的表达 三、丝状真菌中的表达 枯草杆菌蛋白酶的蛋白质工程 目前在原核系统中使用得最普遍的强启动子主要有5个： ① 大肠杆菌的lac启动子： ② 大肠杆菌的trp操纵子的启动