过氧化氢诱导鼠晶状体上皮细胞转录因子-κB表达及凋亡的实验研究-眼科学(白内障)专业论文.docxVIP

硕士学位论文摘要 硕士学位论文 摘要 【研究背景】核因子．KB(NF—KB)是一种作用非常广泛的转录因 子，普遍存在于人类各种类型的细胞中。1986年，Sen和Baltimore 首先从B淋巴细胞核中检测到这种核蛋白因子，它能与免疫球蛋白K 链基因增强子vd3序列特异结合，并能促进K链基因的表达。在静止 或未受刺激细胞中以非活化状态存在于细胞浆中，当受到诱导剂刺激 时即易位到细胞核，促进相关基因的转录，发挥其调控作用。目前已 知NF—vd3在机体的免疫应答、炎症反应和细胞的生长发育等方面发 挥着重要作用。近年来研究发现，活性氧参与激活NF．v．B，即该转录 因子参与了氧化刺激与损伤的过程；另外发现该转录因子在细胞凋亡 的发生过程中起着重要的调节作用。众所周知，氧化刺激、自由基损 伤、细胞凋亡已被认为是许多眼科疾病的发生基础。Li WC等认为， 晶状体上皮细胞凋亡是除先天性白内障以外的所有类型白内障形成 的细胞学基础，氧化损伤则是晶状体上皮细胞凋亡的重要诱发因素。 但氧化损伤导致晶状体上皮细胞凋亡的分子机制尚未完全明了， NF．r．B与白内障发病机制中晶状体上皮细胞的相关研究以及NF．曲 在氧化损伤与晶状体上皮细胞凋亡之间充当何种角色国内外报道仍 较少。 白内障是世界性致盲性眼病。据WHO统计，全世界盲人约有 2700万．3500万，其中自内障盲人为1600万一2100万。我国约有500 万白内障病人。目前，白内障的治疗主要依靠手术，但不可避免的手 术并发症和社会经济问题十分严重。因此，寻找有效的药物预防和治 疗方法，早期控制白内障，仍是该领域的研究热点。目前广泛认为： 晶状体混浊是一系列复杂过程的最后阶段，其中氧化作用为主要的激 发因素。因此，白内障药物仍主要集中于抗氧化剂的研究和应用。毗 咯二硫代氨基甲酸已酯(PDTC)是一种对NF—r,B有特异性阻断作用 的抗氧化剂，目前国内外尚无有关应用PDTC抗晶状体上皮细胞凋亡 的抗氧化剂，目前国内外尚无有关应用PDTC抗晶状体上皮细胞凋亡 和白内障形成的相关研究。因此，我们的实验研究试图通过检测鼠白 内障模型晶状体上皮细胞NF．vJ3的表达与凋亡，探讨NF．r．B在氧化 损伤致白内障形成过程中的作用，了解PDTC对NF．心表达及晶状 体上皮细胞凋亡的影响，为白内障预防和治疗的药物筛选提供实验依 据。 【目的】1．建立离体H202诱导的鼠白内障模型。2．观察鼠白内 障形成过程中晶状体上皮细胞NF．KB的表达及PDTC对其的抑制作 用。3．观察鼠白内障形成过程中晶状体上皮细胞的凋亡及PDTC对 其的抑制作用。 【方法】1．28只大鼠晶状体离体培养6小时后，取其中50只透 明晶状体随机分为H20：组和对照组，建立离体鼠白内障模型，在3h、 6h、12h、24h、48h五个不同时相进行观察。用Adobe Photoshop 6．0RGB 模式分析晶状体混浊程度。2．70只大鼠晶状体离体培养6小时后， 取其中125只透明晶状体随机分为H20：组、对照组和5个不同浓度 梯度(5×10‘1retool／l-5x10‘mmol／1)的PDTC处理组。分别在3h、6h、 12h、24h、48h五个不同时相观察。PDTC处理组培养24小时。3．用 免疫组织化学方法检测各组晶状体上皮细胞NF．r]3的表达，观察NF ．KB表达与过氧化氢作用时相的关系及PDTC对其的抑制作用。4．用 TUNEL方法检测各组晶状体上皮细胞的凋亡，观察PDTC对它的抑 制作用。 【结果】1．H202组随时限延长，晶状体混浊度逐渐增加。2．H202 组晶状体上皮细胞NF．r．B随作用时间延长表达逐渐增多，24小时达 高峰。对照组无显著变化。3．H202组晶状体上皮细胞凋亡数量随作 用时间延长逐渐增多，48小时大部分凋亡。4．不同浓度的PDTC处 理组除10～mmol／iNF，rd3阳性表达率与H202组比较无统计学意义 (Po．05)外，其余各浓度组与H202组、对照组两两比较均有统计学 硕士学位论文 硕士学位论文 中丘：摘要 差异。5．不同浓度的PDTC处理组除10’4、10～mmol／1NF．v,B晶状体上 皮细胞凋亡发生率与H202组比较无统计学意义(pO．05)外，其余各 浓度组与H202组、对照组两两比较均有统计学差异。 【结论】1．H202可诱导建立离体鼠白内障模型。2．Photoshop 6．0R