广州儿童秋冬腹泻中人类杯状病毒分子流行病学、临床特征及感染的危险因素分析-流行病与卫生统计学专业论文.docx

硕士学位论文广州儿童秋冬腹泻中人类杯状病毒分子流 硕士学位论文 广州儿童秋冬腹泻中人类杯状病毒分子流 行病学、临床特征及感染的危险因素研究 硕士研究生：刘翼 指导教师：聂军 摘要 研究背景、目的、意义人类杯状病毒(Human Calicivirus，HuCV)包括 诺瓦克样病毒(Norovirus，NVs Norwalk-like virus，NLVs)和扎幌样病毒 (Sappovirus，SVs Sapporo-like virus，SLVs)，是导致人类急性胃肠炎的常 见病原体，也是仅次于轮状病毒导致儿童急性腹泻的重要病原体。 NLVs与SLVs分别是在1968年、1977年的美国俄亥俄州的Norwalk地区及日 本扎幌地区发现的。此后，在世界多个国家均检测到此两类病毒，NLVs又曾被称 为小RNA病毒、小圆结构病毒。1998年国际病毒分类委员会根据病毒形态、结构、 抗原特性、基因序列和遗传进化分析等研究成果，将此两类病毒归入杯状病毒科。 HuCV毒株间具有很大的核苷酸序列多样性，依据基因结构中RNA多聚酶及壳蛋白 区域序列的差异，将NLVs分为三个遗传组(genetic group)，每一遗传组又分别 包括多个不同的群(cluster)。SLVs分为三个基因型，五个基因亚型。Farkas等 最近研究表明，SLVs存在更多的基因型与基因亚型，表明了HuCV基因的多样性。 长期以来，由于检测方法的局限，对HuCV给人类造成的危害及其严重程 度缺乏正确的认识，常常低估其危害。1992年以美籍学者JiangXi为首的研究 组建立并发展了RT-PCR方法检测HuCV后，HuCV所致疾病的危害性和严重性越 来越被研究者重视。 HuCV呈全球流行趋势，已成为人类非菌性急性胃肠炎暴发和散发的最主要原 因之一。在1997年7月-2000年6月美国发生的233起非菌性急性胃肠炎的暴发 中文摘要 中文摘要 中确认其中的93％是由NLVs所致。在芬兰2398名2—24月龄儿童为期两年的前瞻 性非菌性急性胃肠炎病原学研究中发现HuCV的检出率为29％，与轮状病毒的检出 率一致。在荷兰1998年12月至1999年12月进行的队列研究表明腹泻患者中iluCV 阳性率为17％。 我国对于HuCV的研究则起步较晚，最早是方肇寅等在1990一199i年我国河 南急性腹泻门诊收集的腹泻患儿粪便中检出两例NLVs。之后，在我国的北京、长 春、河北、广州等地区均检测出HuCV，其阳性率分别为24．9％、16％、31．6％、9．1％。 最近资料显示2003年秋冬季在广州的中学、小学、幼儿园均发生了NLVs胃肠炎 的暴发。这些研究资料表明我国HuCV的感染已非常普遍，是仅次于轮状病毒导致 儿童腹泻的病原体，并且NLV所引起急性胃肠炎的暴发也已较多见。 综上所述，HuCV引起的感染在我国北方已非常普遍，在我国南方广州也已检 测到NLVs的存在，并且导致了多起急性胃肠炎的暴发，但目前，国内研究主要侧 重病原、抗体的检测，故有关结果缺乏系统、全面和代表性，同时也缺乏其它流 行病学及临床有关资料。因此，本研究拟在明确广州地区存在HucV感染的基础上 进一步研究HuCV感染的分布特征、感染频率、流行毒株的分子生物学特点、主要 临床特点及危险因素，为检测试剂的开发、有效疫苗的研制等研究打下基础和创 造条件。研究结果将为人们更清楚、更明确的认识HuCV感染的危害性和严重性提 供信息，为广州地区制定有针对性的防治对策奠定理论依据，同时也丰富了我国 对HuCV感染的有关理论和信息。因此，开展本研究具有现实意义和紧迫性。 研究方法收集南方医院儿科门诊及病房临床诊断为病毒性腹泻患儿的粪便 标本，并同时进行调查，填写调查表，电话随访完善调查表。对收集的标本采用 ELISA检测轮状病毒(RV)，检测Rv阴性标本采用RT--PCR检测NLVs，RV及NLVs 均为阴性标本采用RT--PCR检测SLVs。随机抽取部分检测HuCV阳性标本进行纯 化、测序，并采用DNAstar、Treeview等软件进行序列分析、绘制进化树。对调 查表资料用统计软件包SPSSIO．0建立数据库，采用1：1配对病例(NLVs)一病 例(RV)比较研究及l：1配对病例对照研究分析NLVs感染的临床特点及危险因 Ⅱ 硕士学位论文 硕士学位论文 素。对于NLVs病例与轮状病毒病例的对比研究采用r检验、t检验，对于危险因 素分析采用l：1单因素及多因素条件Logistic回归分析。 研究结果 1．在2003年10月--2004年1月及2004年10月--2005年1月两阶段共收 集到腹泻患儿粪便标本648份。检测出轮状病毒阳性标本339份，阳性率52．31％ (339／548)，NLVs阳性标本80份，阳性率12．35％