生物竞赛-生物化学-36DNA转录-顶级资源《生物化学原理(第二版)(三)》(62张PPT).pptVIP

RNA聚合酶II所负责的基因转录 催化mRNA、miRNA、具有帽子结构的snRNA和某些病毒RNA的基因转录。 mRNA的基因转录受到多种顺式作用元件的控制，包括核心启动子、调控元件、增强子和沉默子。 核心启动子功能与细菌的启动子相当，负责招募和定位聚合酶II到转录起始点，以正确地起动基因的转录，也可能通过促进转录复合物的装配或稳定转录因子的结合而提高转录的效率。 核心启动子包括：TATA盒、起始子（Inr）、TFIIB识别元件（BRE）、下游启动子元件（DPE）和GC盒。 调控元件所起的作用是调节基因的转录效率，包括上游临近元件（UPE）和上游诱导元件（UIE），两者的作用都需要结合特殊的反式作用因子。 参与蛋白质基因转录的转录因子有两类，一类为基础转录因子，另一类属于特异性转录因子。前者为所有的蛋白质基因表达所必需，后者为特定的基因表达所必需 转录的起始是各转录因子和RNA聚合酶II按照一定次序，通过招募的方式形成PIC。转录因子和聚合酶II与启动子结合的前后次序可能是：TFIID→TFIIA→TFIIB→(TFIIF + RNAP II) →TFIIE→TFIIH。 转录终止于一段终止子区域，但终止子的性质以及它如何影响终止的尚不知晓 真核生物RNA聚合酶II的启动子序列 RNA聚合酶II的基础转录因子 转录因子 亚基数目 功能 TFIID 1TBP 12TAFs 与TATA盒结合 调节功能，有1个与Inr结合 TFIIA 3 稳定TBP与启动子的结合 TFIIB 1 招募RNAPII，确定转录起始点 TFIIF 2 与RNAPII结合，去稳定聚合酶与DNA的非特异性结合，确定转录起始过程中模板的位置。 TFIIE 2 协助招募TFIIH，激活TFIIH，促进启动子的解链。 TFIIH 9 具有ATP酶、解链酶、CTD激酶活性，促进启动子解链和清空。 TFIIS 1 刺激RNAPII的剪切活性（切掉错误参入的核苷酸），提高转录的忠实性。 预起始复合物的形成 TBP (TFIID) 与核心启动子结合 (TATA + Inr) 招募 TFIIB 招募 RNAP II + TFIIF 招募 TFIIE 招募和刺激 TFIIH 解链酶活性解开靠近转录起始点的DNA序列 激酶活性磷酸化CTD RNA聚合酶II催化的基因转录预起始复合物的形成 RNA聚合酶II催化的基因转录的全过程 RNA 聚合酶Ⅱ催化的转录延伸 TFIIS 诱导的mRNA 剪切 古菌的DNA 转录 与复制系统相比，古菌似乎拥有简版的真核转录系统。无论是催化转录的RNA 聚合酶的结构和性质，还是启动子的结构以及转录的基本过程都与真核生物极为相似。然而，在基因表达的调控方面，古菌与细菌接近。 在启动子的结构上，古菌类似于真核生物由RNA 聚合酶Ⅱ所负责转录的基因，一般由三个部分组成：一是位于转录起点上游的TATA 盒，它由TBP 识别；二是位于TATA 盒上游的BRE，它由TFB 识别；三是位于转录起点的起始子元件（Inr） 古菌基因转录的起始 酵母细胞RNA聚合酶II的亚基组成及功能 羧基端结构域——CTD 所有的真核细胞RNA聚合酶II最大亚基的CTD都含有一段由7个氨基酸残基组成的高度保守的重复序列，其一致序列是富含羟基氨基酸的YSTPSPS，因此能够被磷酸化修饰。在酵母细胞，该序列重复了26次，哺乳动物则重复56次。该重复序列是RNA聚合酶II的活性所必需的。缺失突变实验表明，酵母的CTD至少需要13段重复序列它才能保证酵母细胞能够生存。其它研究还表明，CTD没被磷酸化的RNA聚合酶II参与转录的起始，CTD被磷酸化以后，转录才从起始阶段进入延伸阶段，而且磷酸化的CTD对于转录的后加工（带帽和加尾）也是必需的。 转录的详细机制 三步骤反应 1) 起始 2) 延伸 3) 终止 细菌的DNA转录 起始 1) 什么是启动子？ 2) 如何决定启动子序列？ DNA酶I足印法 3) 启动子一致序列 4) 转录复合物的形成 延伸 终止 放射性同位素标记 DNA酶I足印法 实验组 对照组 DNA酶I部分消化 缺少的片段 电泳 放射自显影 足印 细菌启动子的性质 启动子通常由转录起始点上游40bp长的序列组成 包括两段一致序列： “-35 区”—— 一致序列是TTGACA Pribnow盒或“-10 区”——一致序列是TATAAT “－35”区和“－10区”之间的间隔序序列的性质不重要，但长度重要，一般为17±1bp。 “增效元件”——发现在某些转录活性超强的rRNA基因的上游－40和－60之间的区域，富含AT的启动子序列，可将转录活性提高30倍。 如果一个基因的启动子序列与一致序列