应用iTRAQ定量蛋白质组学技术筛选无乳链球菌.PDF

第42 卷 第 3 期 水 产 学 报 Vol. 42, No. 3 2018 年 3 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Mar., 2018 文章编号: 1000-0615(2018)03-0442-10 DOI: 10.11964/jfc.20170110690 应用iTRAQ定量蛋白质组学技术筛选无乳链球菌 鱼源株与人源株差异表达蛋白 1 1 1 1 郭长明 ， 袁 橙 ， 武彩红 ， 朱善元 ， 2 2 2* 刘广锦 ， 陆承平 ， 刘永杰 (1. 江苏农牧科技职业学院，江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室，江苏 泰州 225300; 2. 南京农业大学动物医学院，江苏 南京 210095) 摘要：以斑马鱼和巨噬细胞作为体内、外感染模型，比较无乳链球菌鱼源株GD201008- 001 与人源株A909 的致病性差异，利用iTRAQ技术和质谱分析技术进行差异表达蛋白鉴 定，以期为揭示无乳链球菌不同宿主来源株致病机制提供新思路。实验通过测定菌株 GD201008-001、A909 的斑马鱼半数致死量和巨噬细胞吞噬率，比较二者致病性差异；提 取全菌蛋白，经iTRAQ试剂标记后进行质谱鉴定，质谱数据用软件Mascot 2.2和Proteome Discoverer 1.4进行查库(UniProt数据库)鉴定及定量分析，并对差异蛋白进行GO功能注释 和KEGG通路分析。结果显示，GD201008-001毒力显著高于A909 ；通过iTRAQ分析两株 菌差异表达蛋白，发现差异蛋白涉及的生物学功能较为广泛，在鉴定出的368个差异表 达蛋白中，GD201008-001 中上调表达蛋白193个( 比值1.5) ，下调表达蛋白175个( 比值0.667)。 生物信息学分析预测这些蛋白主要涉及26 个生物学功能，14个通路，推测ClpX 、 GlmS和CpsIVK可能在两株菌致病性差异中发挥重要作用。本研究为阐明无乳链球菌不 同宿主来源株致病性差异奠定了基础。 关键词: 无乳链球菌；鱼源株；人源株；iTRAQ ；蛋白质组学 中图分类号: Q 938.8; S 917.1 文献标志码: A 无乳链球菌(Streptococcus agalactiae) ，亦称 无乳链球菌同属，也是罗非鱼链球菌病的主要 [7] B族链球菌(group B Streptococci, GBS) ，宿主感染 病原之一，海豚链球菌亦可感染人 。因此，推 范围广泛。无乳链球菌是人类新生儿肺炎、脑 测罗非鱼源无乳链球菌可能对人类具有致病