光动力疗法抑制体外培养翼状胬肉成纤维细胞增殖的实验研究-眼科学专业论文.docxVIP

华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 2001级硕士毕业论文 光动力疗法抑制体外培养翼状胬肉成纤维细 胞增殖的实验研究 华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科 研究生：黄艳明 导师：刘恒明教授 摘 要 目的： 1．检测光敏剂血卟啉单l畦(hematoporphyrin monomethyl ether，nMME)在 体外培养人翼状胬肉成纤维细胞中的吸收特性；2．观察HMME介导的光动力疗法 (photodynamic也crapy,PDT)对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞增殖的作用及其 影响因素，为探索光动力疗法治疗翼状胬肉的可行性和有效性提供初步的实验依据。 方法：体外培养人初发、复发翼状胬肉成纾维细胞(以下简称为初发、复发细胞)，取 3．5代用于实验。1．用荧光分析法检测不同HMbIE孵育浓度和孵育时间与初发、复发 细胞吸收即讧№量之间的关系：用IVITT比色法观察不同浓度HMlVlE及不同作用时 间对初发、复发细胞增殖的影响；2．用IVITI法测定不同的光敏剂孵育浓度(0、2．5、 5．0、10、20、40／Ⅱg／nfl)、孵育时间(0、5、10、20、30、60min)和照光剂量(能量 密度：0．62和2．835J／tml2)条件下行PDT对体外培养的初发、复发细胞增殖的影响； 3．用免疫组化法检测PDT对体外培养初、复发细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)表达 的影响；4．用HE染色观察PDT后细胞形态的变化。 结果：1．HMME容易被初发、复发翼状胬肉成纤维细胞吸收，其吸收量随HMME孵 育浓度的增高和孵育时间的延长而增加。尤以加入光敏剂后10rain以内细胞吸收速度 较快，随后进入平台期，45rain后继续缓慢上升。初发、复发翼状胬肉成纤维细胞分 别在浓度≤20、40Aug／ml的HMME中孵育60rain对细胞的增殖无明显的影响。2．单 华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 2001级硕士毕业论文 纯照光对细胞增殖无明显影响。高剂量(2．835J／cm2)照光条件下，HMME孵育浓度≥ 2．5,ug／ml的初发细胞PDT实验组和对照组相比有显著差异(PO．05)，HMME孵育浓度 一10,ug／m!的复发细胞PDT实验组和对照组相比有显著差异(e0．00；40,ug／ml的 HMME孵育1h后用2．835J／cm2的氮氖激光照射，初发、复发细胞增殖的抑制率分别 为61．04％、57．64％；HMME孵育时间≥5min的PDT实验组和对照组相比有极显著 差异(P0．01)。在其它条件相同的情况下，增加激光的能量密度，PDT对细胞增殖的 抑制作用有增强的趋势。3．PDT对体外培养翼状胬肉成纤维细胞的增殖细胞核抗原 (PCNA)表达具有明显的抑制作用；4．PDT处理(2q咖d的HMME孵育1h、激光 能量密度：2．835J／cm2)后的细胞形状变得不规则，胞膜皱缩或破裂，胞核浓缩、边 集，部分细胞崩解成碎片。 结论：PDT对体外培养的初发、复发翼状胬肉成纤维细胞增殖有抑制作用。照光前 光敏剂浓度越高、孵育时间越长，照光剂量越大，PDT效应越强。光动力疗法有可能 用于翼状胬肉的治疗中。 关键词：光动力疗法：翼状胬肉；血卟啉单甲醚；成纤维细胞；细胞培养 2 华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 2001级硕士毕业论文 The Inhibition effect of photodynamic on Pterygium fibroblasts in vitro Postgraduate：Huang Yanming Tutor：Prof Lin hengming Department of ophthalmology,Tongii Hospital，Tongji Medical college， Huazhong University of Science and Technology Objective：To investigate the Inhibition effect of photodynamic with photosensitizer HMME(hematoporphyrin monomethyl ether，HMME)on pterygium fibroblasts in vitro． Methods：1．Cultured 3-5 passage primary and recurrent pteryginm fibroblasts wore treated with different concentration of HMME for different time，and the absotp嘶ty of HMME wore measured by spectrofluor