毛囊干细胞体外诱导成血管内皮细胞的试验研究-中华细胞与干细胞杂志.PDF

( ) 2016 10 6 5 Chin J Cell Stem Cell ( e lectronic e dition), Oct 2016,vol.6, No.5 284 中华细胞与干细胞杂志 电子版 年 月第 卷第 期 · · · · 论著 毛囊干细胞体外诱导成血管内皮细胞的 实验研究 1 1 1 1 1 1 2 3 杜伟斌 全仁夫 郑宣 李强 曹国平 庄伟 邵荣学 杨迪生 【摘要】 目的 建立简单、可靠的毛囊干细胞体外定向分化为血管内皮细胞的方法。方 法 无菌条件下切取 1 周龄 Sd 大鼠触须部皮肤，dispase 酶和Ⅳ型胶原酶混合液消化，显微镜 下分离毛囊隆突部，改良的组织块贴壁法培养 rhFSCs，差速贴壁法纯化，流式细胞仪检测及细 胞免疫荧光染色联合鉴定。用含 10 ng/ml 和 20 ng/ml veGF 165 作为主要诱导因子将细胞分为 两种浓度组别，不传代的情况下分别在 1、2 、3 周内观察诱导后细胞形态；通过流式细胞和细胞 免疫荧光染色检测分化效率；选取最佳诱导因子浓度和工作时间，对诱导后的细胞进行体外官 腔形成实验，并在透射电镜下观察 W-P 小体。流式细胞术检测分化效率实验数据的比较采用单 t 因素方差分析及独立 检验。结果 分离、培养、纯化的rhFSCs 克隆能力好，活力强，生长曲线 β α 呈 S 型。流式细胞及免疫荧光染色联合检测 1 （98.9 ﹪）、6 整合素（97.9 ﹪），CK 15 （68.1﹪）、 P63 （98.5 ﹪）呈高表达，阴性表达 Cd31 （13.6 ﹪）、ve-cadherin （17.9 ﹪）。在诱导液的作用下， 两组细胞从 1 周到 3 周后，均由扁平铺路石样改变到完全被长梭形样细胞占据。流式细胞及免疫 荧光染色检测 Cd31 和 ve-cadherin 显示，Cd31 在诱导 1 周时表达最强，两种诱导因子比较无差 vs t P 异 [ （65.27 ±0.57 ﹪） （66.13 ±0.60 ）﹪，= -1.812， = 0.145]。而 ve-cadherin 在诱导 1 周时表 达也最强，10 ng/ml 要优于 20 ng/ml veGF165 的诱导作用 [（95.57 ±0.85）﹪vs （78.10 ±1.25 ）﹪， t P = 19.977， = 0.001]。10 ng/ml veGF 165 诱导 1 周后的细胞体外管腔形成实验阳性，在透射电 镜下可以观察到内皮细胞特有结构 W-P 小体。结论 毛囊干细胞体外在 10ng/ml veGF 165 的 诱导下，1 周后可成功得到性能良好的血管内皮细胞。可为组织工程血管、细胞移植治疗缺血性 疾病等提供理想的种子细胞。 【关键词】 毛囊； 干细胞； 血管内皮细胞； 诱导因子； 组织工程 1 1 Induction of hair follicle stem cells into endothelial cells in vitro Du Weibin , Quan Renfu , 1