HPLC常故障排除及维护.pptVIP

第一部分： 色谱仪常见故障分析及排除 LC-100液相系统示意图 友情警示：使用缓冲液的注意事项 缓冲液可以提供离子平衡的反离子，并使流动相保持一定的离子强度和pH值，减少拖尾。但是使用缓冲液要注意几点： 1、避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用。 2、缓冲液最好要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。 3、实验后不可用有机溶剂直接过度，有机溶剂会处使盐类析出，造成液路或色谱柱堵塞，可用95：5的水甲醇冲洗。 4、使用缓冲液要及时掌握pH范围，做到胸中有数。 5、清洗液路和柱子时，有温控可加热到30摄氏度易于冲洗。 6、长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路（拆下柱子，走30ml,再用5倍水冲洗）可以避免液路的堵塞。 7、选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。 如何减少单向阀的故障 流动相一定要用0.45μm的滤膜过滤。 避免使泵长期不工作，使流动相干枯。 避免使用高粘度的流动相。 使用带缓冲盐的流动相后，一定要充分清洗。 定期对流动相过滤头进行清洗。 吸入单向阀故障的排除 单向阀的故障现象，极大多数出现在吸入单向阀上。可以将吸入单向阀从泵头上拆下，接上专用针头，用蒸馏水冲洗即可（冲水时注意手指要按住吸入阀头部白色垫圈，防止内部零件冲出）。 如何减少密封圈的磨损 要用优质的流动相。 色谱柱的压力不要太高。即不要使用受污染、老化的色谱柱。 使用带缓冲盐的流动相后一定要用纯水充分清洗。 避免使用高粘度的流动相。 避免在没有流动相时运行泵（建议：在泵进行检测工作时设定最小压力）。 性能维护套件介绍 第二部分： 色谱柱常见故障诊断及维护 1. 常见问题 基线噪音 基线漂移 鬼 峰 峰 型 峰 型 峰 型 峰 型 峰 型 宽 峰 柱外体积效应的影响 1. 不进样时柱压连续升高 - 泵密封垫 - 流动相有颗粒 - 流动相溶解性 - 流动相的不稳定性 (聚合) - 形成柱死体积 (与使用条件有关) 2. 进样时压力升高 - 样品有颗粒 - 样品在流动相中不溶 - 样品组分与固定相不兼容 1. 所有峰都向低保留值方向漂移（酸、碱、中性化合物） - 键合相流失 - 流动相不稳定 (可能性较小) - 溶剂输送系统 (流速变化) 2. 所有峰都向高保留值方向漂移 - 在水/有机溶剂的混合体系中，有机溶剂含量减少 - 柱改变 (可能性较小) - 溶剂输送系统 (流速变化) 3. 离子型化合物的色谱峰的保留值漂移 -流动相中挥发性组分损失 (离子强度, pH 漂移) - 柱改变 (键合相或污染) 1. 与流动相有关的问题 - 使用新鲜的流动相 pH 电导 色谱性能测试 2. 与色谱柱有关的问题 - 测试新柱 - 用标准的测试混合样测试新柱 - “清洗” 色谱柱后再测 - 考虑样品基质与使用条件对柱 稳定性的影响 良好的柱使用规范 预柱与保护柱 Authoring Division Name File Name Security Notice (if required) 带Techtron保护柱的 Zorbax 卡套柱 制备样品: 流动相 在安装柱前后测试压力差 如果柱压力太高，反装色谱柱，并用10-20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱，监测压力变化 若出现沉淀 (如：蛋白凝聚、细胞物、聚合物) 设法用相应的可溶性溶剂，如 0.1% TFA / 80% 乙腈, 6M 盐酸胍, THF, HFIP 若仍无效，应考虑更换过滤片 Column Inlet Frit 由于键合相的水解或硅胶的溶解而造成的色谱柱填料的变化是不可逆的 由于污染而产生的色谱柱变化可以通过适当的清洗使之修复 梯度洗脱的方式 (水 - 强有机溶剂) 通常最有效 低 pH 流动相, 如 0.1% TFA or 0.01M H3PO4, 也是有效的 升高温度（60-80℃） 关于保留时间漂移的专题讨论 保留时间不重现 保留时间不重现有两种不同的情况： 1、保留时间漂移：保留时间仅沿单方向发生变化。 2、保留时间波动：保留时间无固定规律的波动。 保留时间不重现的原因分析 将上述两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮助。 保留时间的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。 事实上，保留时间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化，如固定相流失（例如通过水解），色谱柱污染（由样品或流动相所致）等。 保留时间不重现的因素 保留时间漂移的几种最常见的原因如下： 一?、