加减归肾丸对大鼠乳腺发育不良的干预作用及机理研究-中药学专业论文.docxVIP

广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明： 广州中医药大学学位论文原创性声明 本人郑重声明： 所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工 作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均 己在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名 量垃 日期：7．ot』年}月刀日 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向 国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中 医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影 印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名 垂坯 论文导师签名 日期：≯D塔年g月瑶日 摘 摘 要 目的： 乳腺发育不良是临床常见的现代乳腺疾病，历代中医古籍记载甚少。目前，女性 乳腺发育不良的患病率逐渐升高并趋于年轻化，该病不但影响美观，而且可能影响女 性身心健康及日后的哺乳功能。祖国传统医学和现代医学在乳腺发育不良疾病方面做 了大量研究，但目前依然没有有效且安全的治疗乳腺发育不良的方法或产品。 加减归肾丸是由补肾经典方归肾丸化裁而成，针对肾气亏虚、精血不足证具有良 好疗效的临床经验方，但目前尚无相关的机理研究。本课题在对乳腺发育不良中医病 机再认识的基础上，应用现代医学理论和实验方法，在建立乳腺萎缩大鼠模型的基础 上，研究加减归肾丸对模型大鼠乳头直径和高度、体重、动情周期、性激素水平、子 宫、脾及肾脏器系数、乳腺组织病理形态学的影响，以及对大鼠乳腺组织ERa和PR 基因表达的影响，旨在考察加减归肾丸对大鼠乳腺发育不良的作用，并初步探讨其作 用机理。 方法： 以48只雌性青春期SD大鼠为实验对象，采用经典去卵巢术成功建立大鼠乳腺 萎缩动物模型后，随机分为假手术组、模型组、阳性药组和加减归肾丸高、中、低剂 量组，每组8只，分别进行灌胃给药干预30d后，考察各组大鼠一般状态、动情周期 及体重变化，子宫、脾和肾上腺脏器系数的变化；酶联免疫吸附法测血清雌二醇 (Estradiol；E2)、孕酮(progesterone；P)含量；RT-PCR法检测乳腺组织雌激素受体 0【(Estrogen receptor—a；ERa)、孕激素受体(Progesterone receptor；PR)受体基因表达情况； 观察大鼠乳头直径和高度及乳腺组织病理变化。 结果： 1．乳腺萎缩动物模型：摘除大鼠双侧卵巢可以成功复制大鼠乳腺萎缩模型，该模 型大鼠表现出毛发枯槁、急躁、较难抓取等明显肾阴虚体征，与假手术组比较，造模 14天时体重呈明显上升趋势(PO．05)，动情期天数显著缩短(尸0．01)，动情间期 显著延长(尸O。01)，血清中E2、P含量显著降低(P0．01)。 2．大鼠一般状态及动情周期、体重的变化：给药后，与模型组比较，加减归。肾丸 中、低剂量可明显改善大鼠毛发枯槁及脱毛现象，大鼠容易抓取，隔离攻击实验记分 均显著减小(P0．01)，且给药20天后能显著降低大鼠体重(P0．01)，并显著提高 大鼠规律动情周期数目(尸0．01)。 3．脏器系数的变化：模型组大鼠子宫、肾上腺脏器系数及子宫摄水量与假手术组 比较显著降低(P0．05)。经药物干预后，阳性药及加减归肾丸中剂量可不同程度上 调模型大鼠子宫、肾上腺系数及子宫摄水量(尸0．01，P0．05)，但对大鼠脾脏系数 无明显影响(P0。05)。 4．血清性激素变化：与假手术组比较，模型大鼠血清E2、P水平均显著降低(PO．05)，给药干预后阳性药及加减归‘肾丸低、中剂量均能上调模型大鼠血清E2、P 4．血清性激素变化：与假手术组比较，模型大鼠血清E2、P水平均显著降低(P O．05)，给药干预后阳性药及加减归‘肾丸低、中剂量均能上调模型大鼠血清E2、P 水平(P0．01，P0．05)。 5．ERa和PR基因表达变化：阳性药及加减归肾丸低、中剂量组大鼠乳腺组织中 ERa基因表达较模型组均有显著性增高(尸0．01，P0．05)，而阳性药对大鼠PR基 因表达无明显影响，加减归肾丸低、中剂量组可显著增高模型大鼠PR基因表达(尸 0．01，P0．05)。 6．乳腺组织形态学变化：阳性药及加减归肾丸低、中剂量组较模型组均可显著增 加大鼠乳头直径和高度(P0．01)；在改善大鼠乳腺组织结构方面，加减归肾丸低、 中剂量治疗组可明显改善模型组大鼠乳腺萎缩的状态：乳腺腺体数目增多，腺管腔、 腺泡腔变大，结缔组织疏松，且无乳腺增生现象出现；而阳性药虽能改善大鼠乳腺萎 缩的状态，但部分大鼠出现乳腺